无血清培养在体内外对间充质干细胞的免疫调节活性的影响

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jijipanji
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背景:间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是一种具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞。虽然MSCs可从骨髓、脐带、脂肪、胎盘、脐血及羊膜等多种组织中分离得到,但脐带组织中的MSCs细胞数的含量最为丰富。目的:对分离培养的人脐带来源的间充质干细胞(hUC-MSCs)进行鉴定。方法:(1)我们采用双酶消化的方法分离hUC-MSCs;(2)应用流式细胞仪检测hUC-MSCs的免疫表型;(3)采用油红O染色液、茜素红S染色液进行hUC-MSCs的染色以鉴定hUC-MSCs的成脂成骨等多向分化的潜能。结果:(1)hUC-MSCs呈典型的,长梭形的贴壁细胞;(2)hUC-MSCs均高表达CD29、CD44、CD54、CD73、CD90、CD105、CD106及HLA-ABC等间充质干细胞免疫表型而不表达CD11b、CD14、CD34、CD45及HLA-DR等造血干细胞的免疫表型,也不表达CD80和CD86等协同刺激分子的免疫标记;(3)hUC-MSCs具有向脂肪细胞、成骨细胞等细胞分化的潜能。结论:我们成功分离及培养了人脐带来源的间充质干细胞。背景:MSCs具有强大的免疫调节活性,对T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞、树突细胞、抗原递呈细胞、中性粒细胞及巨噬细胞等多种免疫细胞均有免疫调节作用。虽然目前无血清培养在体外可支持MSCs的扩增,保持原有的细胞大小、免疫表型及多向分化的潜能,但对UC-MSCs免疫调节活性的影响还不是很清楚。目的:无血清培养在体外对hUC-MSCs免疫调节活性的影响。方法:(1)采用流式细胞术检测hUC-MSCs的免疫表型及细胞凋亡;(2)应用油红O及茜素红S染色鉴定hUC-MSCs的成脂成骨等分化潜能;(3)采用MTS方法检测细胞增殖;(4)采用酶联免疫吸咐试验检测细胞上清的IFN-γ和PGE2等蛋白水平;实时定量PCR方法检测IFN-γ、TNF-α、IL-21、IL-22、IL-26、IDO1、COX2、HGF、IL-1β及IL-6等mRNA的表达水平。结果:(1)hUC-MSCs在无血清培养基中培养时呈典型的长梭状贴壁细胞;高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105及CD106等间充质干细胞的表面标记,不表达CD34等造血干细胞的表面标记;无血清培养基培养的hUC-MSCs仍具有成脂成骨等分化潜能;(2)无血清培养基培养的hUC-MSCs抑制CD4+T细胞的增殖及凋亡;(3)无血清培养基培养的hUC-MSCs抑制CD4+T细胞分泌IFN-γ及IFN-γ、TNF-α、IL-21、IL-22和IL-26等促炎因子mRNA的表达;(4)无血清培养基培养的hUC-MSCs分泌高水平的PGE2及高表达IDO1、COX2、 IL-1β及IL-6等基因水平,但不表达HGF。结论:(1)hUC-MSCs在无血清培养基中培养仍保持原有的细胞形态、免疫表型、成脂成骨分化等生物学特性;(2)与含10%胎牛血清培养的hUC-MSCs相比,无血清培养基培养的hUC-MSCs也能明显抑制CD4+T淋巴细胞的增殖及凋亡;(3)无血清培养基培养的hUC-MSCs较含胎牛血清培养的hUC-MSCs同样具有较强的免疫抑制功能及分泌较高水平的免疫调节因子。背景:肺动脉高压(PHA)是一种进展性疾病,以肺血管结构的改变引起肺动脉压进行性升高最终导致右心衰竭为主要特征的一组疾病。PHA是临床上常见的一种疾病,其发病机制尚不清楚。然而,研究发现免疫因素在PHA的发病机制中起着非常重要的作用。目的:进一步评价无血清培养基培养的hUC-MSCs在体内的免疫调节功能。方法:(1)用野百合碱建立肺动脉高压模型大鼠:采用乙醇生理盐水溶解野百合碱,再按50mg/kg的剂量注入到大鼠背部的皮下组织;(2)聚苯乙烯软管测定肺动脉平均压;(3)采用HE染色进行肺组织结构的观察;(4)采用CM-DiI标记人脐带来源间充质干细胞;(5)采用酶联免疫吸咐试验和实时定量PCR方法比较各组肺组织和外周血中的TNF-α和肺组织的TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6及IL-18等促炎因子的蛋白及基因水平。结果:(1)无血清血清培养基培养的hUC-MSCs组无毛发、呼吸及活动等异常,而且体重增长较快;(2)无血清培养基培养的hUC-MSCs能明显降低肺动脉高压模型组的肺动脉平均压;(3)无血清培养基培养的hUC-MSCs明显改善肺动脉高压引起的肺血管重构;(4)在无血清培养基培养的hUC-MSCs组的肺组织内有较多CM-DiI标记的hUC-MSCs;(5)无血清培养基培养的hUC-MSCs同样能降低肺组织和外周血中的TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6及IL-18等促炎因子的蛋白及基因水平。结论:(1)无血清培养基培养的hUC-MSCs与含10%胎牛血清培养基培养的hUC-MSCs均能明显的改善肺血管重构;(2)无血清培养基培养的hUC-MSCs在体内较含10%胎牛血清培养基培养的hUC-MSCs同样具有较强的免疫抑制功能。
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