背景与目的葡萄膜炎是一种病因复杂的疾病，愈来愈多的证据表明其发病过程中有多种细胞因子参与，抗炎因子与促炎因子的失衡被认为是其中重要的一个环节。白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）是一种强有力的抗炎物质，它可抑制辅助性T细胞产生细胞因子及其活性，抑制趋化因子、细胞粘附因子、活性氧和氮介质等细胞活性物质的生成。研究表明IL-10作为一种有效的细胞因子调节因子在多种炎症中发挥重要的保护作用。能否将IL-10应用于葡萄膜炎的治疗，目前国外报道尚不多见，国内尚未发现相关报道。本研究应用大肠杆菌内毒素（lipopolysaccharide，LPS）免疫Wistar大鼠建立实验性内毒素诱导的葡萄膜炎疾病模型（endotoxin-induced uveitis，EIU），该模型可作为人类全葡萄膜炎的动物模型，为葡萄膜炎免疫机制及治疗的实验研究提供前提。在制备的葡萄膜炎模型中全身使用白细胞介素-10，观察其对临床表现、组织学改变以及眼内液和血清中肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF-α）、IL-6和IL-10水平变化的影响，探讨IL-10对EIU的治疗作用。方法1．建立内毒素诱导的葡萄膜炎动物模型：选择15只6～8周龄的雄性Wistar大鼠，体重150～180克。按随机的原则分为空白对照组（3只）和实验组（12只）。将LPS溶于无菌生理盐水中，使之终浓度为2 mg／ml，分别取75μl该溶液注射至实验组Wistar大鼠的双后足垫部，每只大鼠的注射总量达到300μg。对照组大鼠双后足垫注射等量无菌生理盐水。分别在不同的时段观察眼部临床改变如虹膜充血、前房闪辉、房水细胞和前房渗出等，根据修改的Hoekzema等的评分标准对大鼠EIU的临床表现进行评价与记分。在LPS注射后24小时、3天、7天各处死EIU大鼠5只，进行组织病理学检查，参照Tilton等的标准对大鼠EIU的病理改变进行组织学分级。2．白细胞介素-10对大鼠内毒素诱导的葡萄膜炎的治疗作用：（1）选择6～8周龄的雄性Wistar大鼠54只。按随机的原则分为三组：空白对照组（A组6只）、EIU组（阳性对照组，B组24只）和IL-10治疗组（C组24只），每组又分为免疫后4小时、24小时和3天三个亚组。（2） A组大鼠双后足垫注射无菌生理盐水；B组大鼠每只双后足垫注射大肠杆菌内毒素300μg；C组分别于注射大肠杆菌内毒素前4.0小时、0.5小时按1μg／kg体重尾静脉内注射重组IL-10，再双后足垫注射大肠杆菌内毒素300μg。（3）临床及组织学检查：Wistar大鼠免疫后每2小时进行裂隙灯及眼底镜观察，详细记录其发病时间、高峰时间、炎症持续时间及临床表现等，根据临床评分标准对大鼠眼部炎症表现进行评价与记分。分别于免疫后4小时、24小时和3天于大鼠内眦静脉丛取血，处死大鼠后取眼球。一只眼球取眼内液进行细胞因子测定，另一只眼球常规做病理切片，光学显微镜下观察病理改变，并参照修改的病理分级标准对大鼠进行分级。（4）应用酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测血清和眼内液中的IL-6、IL-10和TNF-α含量。（5）统计方法：全部数据以均数±标准差（（?）±s）表示，应用SPSS11.5统计软件进行统计学处理。结果本实验在Wistar大鼠中成功地复制出EIU疾病模型，患病率高达100％，且临床表现及组织学特征稳定。EIU组大鼠注射LPS后2～4小时即出现眼部炎症反应，然后炎症表现逐渐加重，于22～24小时达到高峰，表现为前房闪辉、细胞、纤维蛋白素样渗出、瞳孔膜闭及玻璃体混浊等，眼底难以窥入。然后这些体征逐渐减轻，第7天炎症基本消退。LPS注射后22～24小时组织学检查发现虹膜血管扩张充血，前房、虹膜睫状体、视网膜、玻璃体腔内以及脉络膜有大量的粒细胞和一定量的单核细胞、淋巴细胞浸润。IL-10治疗组Wistar大鼠葡萄膜炎的炎性损害明显轻于EIU组，病程显著缩短，疾病临床严重程度评分及组织学分级显著减轻。炎症早期EIU组血清及眼内液TNF-α浓度（212.76±64.26 pg／ml，411.45±177.34 pg／ml）均显著高于空白对照组（51.03±9.59 pg／ml，26.80 pg／ml），而IL-10治疗组TNF-α浓度下降至接近空白对照组的水平（61.90±23.24 pg／ml，160.55±32.15 pg／ml），统计分析IL-10治疗组中血清及眼内液的TNF-α水平较EIU组下降且具有显著性差异(F_血清=13.77，F_眼内液=26.77，p＜0.01)；EIU组血清和眼内液IL-6浓度均高于空白对照组，而IL-10治疗组血清IL-6水平明显下降，低于EIU组且具有显著性差异(F_血清=12.65，p＜0.01)；治疗组血清IL-10水平较EIU组明显升高(F_血清=8.96，p＜0.01)；但治疗组眼内液的IL-6和IL-10的变化较EIU组不具有显著差异(F_{IL-6眼内液}=2.05，F_{IL-10眼内液}=0.01，p＞0.05)。结果还显示血清和眼内液IL-6与眼部炎症的严重程度均有相关性(r_血清=0.687，p＜0.01；r_眼内液=0.672，p＜0.01)，眼内液TNF与眼部炎症程度也存在正相关（r=0.707，p＜0.01）。结论大肠杆菌内毒素在Wistar大鼠诱导出严重的类似于人类全葡萄膜炎的动物模型。该方法简便、稳定、重复性好、发病率高，这为进一步研究葡萄膜炎的免疫机制及治疗方法奠定了可靠的实验基础，同时本研究就内毒素诱导葡萄膜炎（EIU）与S抗原诱导的实验性自身免疫性葡萄膜炎（experimental autoimmune uveitis，EAU）进行了比较并初步探讨了LPS的免疫作用机制。IL-10作为炎性细胞因子合成的抑制因子，全身使用能显著抑制内毒素诱导的葡萄膜炎模型中的前炎症因子TNF-α和IL-6，降低了其在血清及眼内液中的水平，有助于重建炎症因子／抗炎因子的平衡，减轻眼组织的病理损害，起到治疗EIU的作用，这为临床葡萄膜炎的免疫治疗提供了直接的证据。发展新型免疫治疗策略，尤其是通过IL-10等细胞因子调节剂对葡萄膜炎患者体内细胞因子进行干预，将是未来葡萄膜炎治疗学的研究方向。