【摘 要】
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目的:①鉴定、提取和纯化含人肿瘤坏死因子-α(human tumor necrsis factor-α,hTNF-α)基因的pSV23SHTNF穿梭质粒.②探索利用阳离子脂质体介导pSV23SHTNF穿梭质粒转染Tca811
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目的:①鉴定、提取和纯化含人肿瘤坏死因子-α(human tumor necrsis factor-α,hTNF-α)基因的pSV23SHTNF穿梭质粒.②探索利用阳离子脂质体介导pSV23SHTNF穿梭质粒转染Tca8113舌癌细胞的最佳方法.③探讨hTNF-α基因转染对舌癌细胞生长的影响及其机理.④探讨干扰素-γ(IFN-γ)与hTNF-α基因转染联合应用对舌癌细胞生长的影响.⑤观察人胚成肌细胞转染hTNF-α的表达水平.结论:①E.coli K12 MC 1061大肠杆菌已被含hTNF-α基因的穿梭质粒成功转化.②该课题采用碱裂解法及改进的纯化方法所提取的质粒DNA纯度可以满足细胞转染要求.③通过阳离子脂质体DOSPER介导的质粒基因转染,按4ul DOSPER/1.5ugDNA的脂质体/DNA复合物比例转染能达到很高的转导效率和目的基因的高水平表达.④阳离子脂质体介导的hTNF-α基因转染可在Tca8113舌癌细胞中高表达并抑制舌癌细胞的生长.⑤单纯使用IFN-γ对舌癌细胞无直接杀伤抑制作用,但联合应用IFN-γ能增强hTNF-α基因转染对舌癌细胞的杀伤抑制作用,且抑瘤效率随IFN-γ浓度的升高而增强.⑥可以用hTNF-α基因转染舌癌周围肌细胞,使癌周微环境肌细胞持续旁分泌浓度hTNF-α并抑制舌癌细胞向肌深层浸润.
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