雪旺细胞(Schwann cells，SCs)是形成周围神经髓鞘的胶质细胞，1839年德国科学家Theodor Schwann最先描述。移植的雪旺细胞可在周围神经内存活、增殖、迁移和分化，它可分泌多种神经营养因子(NTFs)、细胞黏附分子和细胞外基质，促进和引导周围神经轴突的再生。雪旺细胞在周围神经再生修复过程中起着非常重要的作用，雪旺细胞和功能的恢复被公认为是周围神经再生的两个最重要因素。该论文研究是为了寻找一种分离方法，能在短时间内从新生(1～2天)的Wister大鼠乳鼠的坐骨神经分离和培养出原代雪旺细胞，而且还要求其在数量上达到10~6／ml以上，纯度达到90％以上，来满足用人工材料修复缺损的周围神经的临床需要。将增值一定数量的雪旺细胞种植于修复周围神经的自组装材料(聚乳酸—壳聚糖—硫酸软骨素，PDLLA-CHS-CS)，检测自组装制备的PDLLA-CHS-CS材料的生物相容性和PDLLA-CHS-CS材料对雪旺细胞增值的影响。将PDLLA-CHS-CS材料修复成年Wister大鼠的坐骨神经，研究PDLLA-CHS-CS材料对修复周围神经的影响。雪旺细胞的分离采用了组织块法、热酶消化法、冷酶分步消化法和冷酶联合消化法。神经组织块通过以上四种不同分离方法得到的细胞，行双30min差速贴壁后，并对四种方法分离出来的细胞总数、活细胞的数量以及雪旺细胞的纯度进行比较，得出冷酶联合消化法从分离时间、纯度、浓度和细胞活性，均能达到从自体组织快速分离和培养雪旺细胞的要求。雪旺细胞的培养采用的培养液是DMEM／F12+10％FBS(胎牛血清)，用有丝分裂抑制剂(阿糖胞苷，Ara-C)去除或抑制成纤维细胞生长，用成纤维细胞生长因子(bFGF)使雪旺细胞得到进一步增殖。通过一代的培养，雪旺细胞的浓度达到10~6／ml以上，雪旺细胞的纯度达到90％以上，在数量和纯度上能够满足雪旺细胞种植于材料修复周围神经的需要。用MTT试验绘制雪旺细胞的生长曲线，得出雪旺细胞的倍增时间在2～7天。雪旺细胞的鉴定采用了常规HE形态染色和免疫组织化学染色，免疫组织化学染色使用辣根过氧化物酶标记的抗S-100蛋白细胞免疫组织化学染色和异硫氰酸荧光(FITC)标记的抗NGFRp75蛋白细胞免疫组织化学染色。聚乳酸(PDLLA)，壳聚糖(CHS)具有良好的生物相容性，硫酸软骨素(CS)是细胞外基质的成分之一，具有促进周围神经再生的作用。通过静电自组装将PDLLA，CHS，CS制备成多层的复合材料，即克服了聚乳酸降解慢等缺点，也克服了壳聚糖机械强度不够等弱点，再添加一些能促进雪旺细胞增殖的细胞外基质成分，应是一种理想的周围神经缺损修复材料。通过在PDLLA，CHS，PDLLA-CHS-CS复合材料上种植雪旺细胞进行培养的一段时间进行体外实验，如：MTT实验，激光扫描共聚焦显微镜和环扫电镜观察材料表面细胞生长的情况。结果显示PDLLA-CHS-CS复合材料与雪旺细胞具有良好的亲和性和良好的生物相容性，而且PDLLA-CHS-CS复合材料相对于基体材料PDLLA，CHS对雪旺细胞的增殖作用更加明显。通过动物实验，将PDLLA-CHS-CS材料修复缺损和损伤的大鼠坐骨神经，发现PDLLA-CHS-CS材料能够促进缺损和损伤的大鼠坐骨神经的再生，而且NGF有利于周围神经的再生。