抗龋齿蛋黄抗体的制备及其研究

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变形链球菌属是目前公认的致龋菌,其中与人类龋病发生关系密切的是变形链球菌和远缘链球菌。本文通过以远缘链球菌为抗原免疫母鸡使其产生特异性抗体,特异性抗体会从鸡血清中转移至蛋黄内。以这种蛋黄为原料对抗体进行分离提取,获得了具有较高效价的蛋黄抗体。 对远缘链球菌生长条件的研究表明:菌体的最适生长pH为7.0左右,以5%的蔗糖作为碳源时,能使菌体获得较好的生长,而且实验表明PABA有促进远缘链球菌生长的能力,其最佳浓度为10-4g/L。 葡糖基转移酶是导致龋齿的主要毒力因子之一。实验通过超声破壁、硫酸铵沉淀、DEAE—Sepharose以及Superdex 200的分离提取后,GTF的比活力为原来的20.5倍,达到1.91u/mg。对提取的GTF性质研究表明:其反应的最适温度和最适pH值分别为37℃和6.8。 蛋鸡经免疫后,结果表明蛋黄中的抗体在一定时期内维持在较高的水平;通过对鸡产蛋率的监测,可知免疫对鸡总产蛋率影响不大,说明免疫程序合理。蛋黄中的抗体经过一系列提取纯化,最后得到纯度为95.7%的样品,其相对分子质量约为198000。 用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定蛋黄抗体的活性时,该特异性抗体抗远缘链球菌超声破壁液的效价比一般IgY提高了4个滴度,即16倍;而抗葡糖基转移酶的效价比一般IgY提高了2个滴度,即4倍。 抗远缘链球菌的粘附实验表明,蛋黄抗体能有效的抑制远缘链球菌的粘附作用。产酸抑制实验也表明了蛋黄抗体对菌体的产酸量有着明显的抑制作用。通过人体口腔抑菌实验发现,蛋黄抗体能有效的降低变形链球菌与远缘链球菌在口腔链球菌中的含量,从而达到防止龋齿的效果。
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