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本研究主要目的在于探索我国主要流行毒株HIV-1 B/C重组毒株感染者的特异性CTL应答特征及其对病毒复制的影响,为研究HIV的致病机制和研制HIV疫苗提供基础数据。
采用以HIV-1 B亚型和HIV-1 C亚型毒株为基础设计的覆盖调节蛋白Rev、Tat和附属蛋白Vpu、Vpr、Vif及Nef全长的肽段,应用酶联斑点测定技术(ELISPOT)和流式细胞内因子染色技术(ICS)对68例HIV-1 B’/C重组病毒感染者针对各调节蛋白和附属蛋白诱发的CTL应答特征进行了研究,并且探讨了特异性CTL反应与病程进展的相关性。对其中17例感染者做了HLA-I类分子的基因分型,并分析了他们针对覆盖HIV-1 B亚型和HIV-1 C亚型毒株全基因肽段的特异性CTL反应,初步探讨了这17例感染者的HLA-I类基因的多态性及其与病程进展和免疫反应的关系。
研究数据显示:调节蛋白Rev、Tat和附属蛋白Vpr、Vpu、Vif都能被机体的CTL识别。HIV-1 B亚型Rev蛋白、Tat蛋白、Vpu蛋白、Vpr蛋白、Vif蛋白、Nef蛋白人群识别率分别为28%、16%、13%、44%、32%、87%。HIV-1 C亚型Rev蛋白、Tat蛋白、Vpu蛋白、Vpr蛋白、Vif蛋白、Nef蛋白的人群识别率分别为43%,13%,6%、44%、60%、84%。其中Nef蛋白和Vpr蛋白有较高的免疫优势性,而Vpu蛋白则最少被识别。在Nef、Vpr、Vif和Rev蛋白区有多个免疫优势区域。免疫优势区主要集中于HIV-1 B亚型Rev蛋白的aa1-aa23、Vpr蛋白的aa9-42、Vif蛋白的aa93-115、Nef蛋白的aa8-23,aa65-156和aal76-193:HIV-1 C亚型Rev蛋白的aa9-aa28、Vpr蛋白的aa25-42、Vif蛋白的aa17-34、aa93-115、Nef蛋白的aa8-23,aa65-156和aa176-193。HIV-1 B亚型和HIV-1 C亚型病毒肽库的免疫优势区域基本一致。HIV-1 B’/C重组病毒感染者对HIV-1 B和HIV-1 C两种亚型肽库可以产生广泛的交叉反应。68例感染者有18%的人对Rev蛋白至少一条肽有交叉反应,对Tat蛋白、Vpu蛋白、Vpr蛋白、Vif蛋白、Nef蛋白至少一条肽有交叉反应的人分别占12%,6%、38%、26%、82%。HIV-1 B/C重组毒株的重组模式可能影响感染者对两种亚型肽库的CTL应答,与病毒序列的重组组段相同亚型的肽可以诱发更强的CTL反应。以针对调节蛋白和附属蛋白特异性CTL应答的累积反应强度的对数值和反应广度(阳性反应肽段数)与感染者的CD4 T细胞计数和血浆病毒载量的对数值作Spearman秩相关分析,结果显示针对HIV-1 B亚型Rev和Vpu的反应广度与CD4 T细胞计数呈正相关趋势:Tat、Vpr、Vif和Nef蛋白的反应广度与CD4 T细胞计数呈负相关趋势;Vpu的累积反应强度与CD4 T细胞计数呈正相关趋势;Rev、Tat、Vpr、Vif和Nef蛋白的反应广度与CD4 T细胞计数呈负相关趋势;HIV-1 B亚型各蛋白的反应广度和累积反应强度均与血浆病毒载量呈正相关趋势。针对HIV-1 C亚型Rev的反应广度与CD4 T细胞计数呈正相关趋势;Vpu、Tat、Vpr、Vif和Nef蛋白的反应广度与CD4 T细胞计数呈负相关趋势;Vpr的累积反应强度与CD4 T细胞计数呈正相关趋势;Rev、Tat、Vpu、Vif和Nef蛋白的反应广度与CD4 T细胞计数呈负相关趋势;针对HIV-1 C亚型各蛋白的反应广度和累积反应强度均与血浆病毒载量呈正相关趋势。除针对HIV-1 C亚型。Rev蛋白和Nef蛋白的CTL反应的反应强度与血浆病毒载量水平的正相关关系有统计学意义外,余均无统计学意义。根据CD4细胞水平对68例感染者进行分组的研究结果表明CD4细胞 200-350cells/μL组感染者的CTL,反应强度比CD4细胞水平<200 cells/μL的感染者组和CD4细胞水平>350 cells/μL的感染者组高。
对17位感染者进行了HLA-I类基因分型,共检出12种HLA-A等位基因,18种HLA-B等位基因,12种HLA-Cw等位基因。携带A*36和Cw*16的感染者分别具有最低和最高的CD4 T细胞计数,携带。B*46和Cw*02的感染者具有最低的病毒载量,而携带A*36的感染者具有最高的病毒载量。对这17位感染者HLA-I类分子限制性表位的初步分析发现有24条肽与某一HLA分子具有统计学意义的关联。其中的三条多肽包含已经被鉴定的相应HLA分子限制的表位,其余二十一条多肽可能包含未被鉴定的新表位。