利用噬菌体表面展示技术筛选黏附人血清白蛋白的功能肽的研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hou_sen
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本论文利用噬菌体表面展示技术(phage display technology, PDT)筛选能与人血清白蛋白(HSA)结合的肽段,欲将此类多肽插入到蛋白质药物上,提高蛋白质药物在血清中的半衰期,从而达到长效的目的。噬菌体表面展示技术是一种对多肽功能非常有效的筛选技术,即将外源蛋白分子或多肽的基因克隆到丝状噬菌体基因组中,与噬菌体外膜蛋白融合表达,展示在噬菌体颗粒的表面。由于外源蛋白或多肽的基因型和表型统一在同一噬菌体颗粒内,因此,通过表型筛选就可以获得它的编码基因。被筛选的噬菌体库还可以在大肠杆菌中进行在扩增,从而可以进行连续多轮迭代选择,得到高亲和力序列。实验中以人血清白蛋白为靶分子,利用噬菌体人工肽库技术从Ph.D.-7肽库中筛选出与其特异性结合的多功能肽段。将噬菌体表面展示肽库与用人血清白蛋白包被的微孔共同孵育,洗去未结合的噬菌体,再用洗脱液洗脱特异性结合的噬菌体。被洗脱的噬菌体进行扩增,然后进行下一轮的结合/扩增,经过2-3轮淘选后,对所得单克隆进行DNA序列测定。淘洗过程中的筛选标准是回收率和选择比。回收率是洗脱得到的噬菌体量与投入的噬菌体量的比值;选择比(P/B)是HSA包被板与对照空白板上洗脱噬菌体量的比值。实验中,如果这两个筛选系数明显增加,则可得到阳性克隆。为了获得较好的洗脱效果,比较两种不同的洗脱方法,一种方法是甘氨酸-盐酸(pH2.2)进行洗脱;另一种方法是用竞争性洗脱液(HSA靶蛋白溶液)进行洗脱。最后,挑取选择比较高的5个阳性克隆进行DNA序列测定。人血清白蛋白(HSA)是药物设计中理想的长效化载体蛋白,可用于改善药物的半衰期。与人血清白蛋白融合或者与人血清白蛋白黏附都已成为改善蛋白质药物药代动力学特性的策略。本论文对二者进行比较发现,尽管融合HSA的蛋白质药物在体内的半衰期大大延长,但其生物活性明显下降,然而黏附HSA的蛋白质药物的生物活性基本不变,同时半衰期明显延长。
其他文献
1940年仲夏,日本侵略者为了掠夺中国山西的煤炭资源,抢修德州至石家庄的铁路。他们在冀南各地到处修碉堡、设据点、挖封锁沟、筑封锁墙。搞得据点、碉堡星罗棋布;公路、沟墙
【正】唐山市荣茂矿业有限公司是经迁安市工商管理局于1998年8月批准成立的,地址位于迁安市马兰庄镇,注册资13900万元,法定代表人宫翠花,总资产36501万元。现有矿山一座,年产
红军长征,是一次伟大的战略转移。这次战略转移的落脚点选择在哪里,即新的革命根据地建立在哪里,是关系长征的成败和中国革命前途的重大问题。事实上,红军长征最后到连陕北,
【正】"河北省综合治理先进村"、"沧州市文明村"……一张张奖状、一块块奖牌挂满了村办公室;村级公路开通了、农村电网改造了、村办企业建成了、新建校舍使用了、农民收入增
目的:评价经皮椎体成形术(PVP)治疗椎体压缩性骨折的围手术期护理效果。方法:PVP术前对12例患者给予相应的心理疏导及训练护理,术后严密观察并发症并指导患者进行康复功能训
研究目的:随着中国高速铁路的蓬勃发展及世界各地强烈地震的频发,桥梁减隔震技术及产品迎来了其推广应用的最佳机遇。本文通过对TJGZ—FPB系列摩擦单摆支座理论、设计及测试的
以2009—2014年披露社会责任报告的A股上市公司为样本,研究会计稳健性与公司治理对企业社会责任报告印象管理的交互影响。结果表明:企业会计稳健性越高,社会责任报告印象管理
萤石作为一种不可再生资源,是重要的非金属矿物,是生产氟工业产品的主要原料,被广泛应用于冶金、化工、建材、轻工、光学、雕刻和国防等领域。随着萤石的应用领域不断拓宽,对
【正】 资金拆借是金融机构之间为融通资金而开展的一种短期资金借贷业务。它是利用各银行和非银行金融组织之间在资金筹集和运用上的时间差、地区差、行际差、项目差、存贷
【正】 结合中国人种皮肤特点,从多种鲜花中提取美容护肤元素的新一代产品——“花之素”天然滋润化妆品系列,由广东佛山市安安化妆品厂研制成功,投放市场后深受广大消费者的