类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）是一种慢性自身免疫性疾病,导致许多组织和器官的慢性全身性炎症反应,主要破坏柔性滑膜关节。全世界大约有0.24%的人口患有风湿性关节炎,这类疾病导致了巨大的经济损失和病人的沉重负担。成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like synoviocytes,FLS）作为滑膜衬里的优势细胞,可在RA滑膜中被激活,并表现出多种肿瘤样的生物学行为。RA FLS是关键的效应细胞,几乎在RA发生发展的所有方面均发挥关键作用。水通道蛋白（Aquaporins,AQPs）是一个膜转运蛋白家族,可以参与调节水或小分子的流入和流出。水通道蛋白1（Aquaporin 1,AQP1）作为哺乳动物AQPs的重要成员,可在许多器官和组织中表达,包括可以在RA滑膜组织中表达。除了能控制水的内流和流出外,AQP1还可以在调节各种生物过程中发挥重要作用,如可以调控细胞的增殖、迁移、侵袭和炎症反应。越来越多的证据表明,RA滑膜中AQP1的过表达可导致关节积水的形成、关节肿胀和滑膜炎症。伞形酮（Umbelliferone,Umb）又称7-羟基香豆素,是一种香豆素类化合物,广泛存在于中草药（如夏枯草、杜仲皮、当归）和蔬菜（如香菜、胡萝卜、金苹果）中。由于Umb具有广泛的药理作用,包括抗氧化作用、抗炎作用、抗糖尿病和抗肿瘤功能等。因此Umb在营养补充剂、多功能保健食品和医药领域的应用也日益引起学术界的关注。在这项研究中,我们讨论了Umb对RA FLS的保护效果,为预防和治疗RA提供了全新的研究方向和药物研发目标。本课题的重点研究内容主要涉及如下两个方面:1、AQP1通过Wnt/β-catenin通路调控RA FLS生物学特性的机制研究目的:本研究旨在揭示AQP1在RA FLS增殖、迁移和侵袭中的决定性作用;阐明AQP1通过Wnt/β-catenin通路调控RA FLS生物学特性的分子机制。方法:构建慢病毒介导的AQP1过表达或沉默质粒载体并转染MH7A细胞。采用MTT法、流式细胞术（PI染色和Annexin V-PE/7-AAD染色）、TMRM染色、划痕实验、Transwell和鬼笔环肽染色检测细胞增殖、周期分布、凋亡、迁移和侵袭情况。Western blot和β-catenin免疫荧光染色显示Wnt/β-catenin通路的变化情况。结论:AQP1可以通过激活Wnt/β-catenin通路促进MH7A细胞的增殖、迁移和侵袭,并且还是调节RA FLS生物学行为的重要决定因子。2、Umb对RA FLS迁移、侵袭和炎症的影响及机制研究目的:本研究的目的是观察Umb对TNF-α刺激的RA FLS迁移、侵袭和炎症的影响,并揭示Umb通过调控Wnt/β-catenin通路发挥治疗RA的药理作用。方法:通过MTT法确定Umb的体外非细胞毒性剂量。采用划痕实验、Transwell和鬼笔环肽染色法检测Umb对TNF-α刺激的MH7A细胞迁移、侵袭的影响。采用ELISA、Western blot,检测Umb对TNF-α刺激的MH7A细胞中的白细胞介素（IL-1β、IL-6、IL-8）和基质金属蛋白酶（MMP2、MMP9）的影响。同时采用Western blot和β-catenin免疫荧光染色法来检测在Umb对Wnt/β-catenin通路的影响。结论:Umb可通过Wnt/β-catenin通路抑制TNF-α诱导的RA FLS的迁移、侵袭和炎症反应。