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本研究以猪为实验动物,采用脂肪细胞离体培养技术,分离培养猪前体脂肪细胞。比较了不同年龄段猪前体脂肪细胞增殖与分化的差异;在此基础上,应用形态学观察、油红O染色提取、MTT比色、分光光度计、RT-PCR等方法,检测了中药成分黄芩素和黄芩苷对前体脂肪细胞增殖、分化的影响,并初步探讨了其作用机制。研究内容及结果如下:1、研究不同年龄段猪前体脂肪细胞增殖与分化的差异。实验以妊娠90天胎猪、1～3日龄仔猪和120日龄猪为对象,分离猪前体脂肪细胞,通过形态学观察、细胞贴壁计数、MTT比色、油红O染色提取法,比较各组细胞形态以及增殖与分化的差异。结果表明,供体年龄影响猪前体脂肪细胞增殖、分化特性;妊娠90天胎猪及1～3日龄仔猪,是猪前体脂肪细胞来源的适宜材料。2、研究黄芩素和黄芩苷对猪前体脂肪细胞增殖的影响。采用MTT比色法检测了在不同浓度黄芩素和黄芩苷作用下,对猪前体脂肪细胞增殖能力的影响。结果表明,高浓度黄芩素和黄芩苷(160～640μmol/L)呈剂量依赖性抑制猪前体脂肪细胞的增殖(P<0.05)。低浓度的黄芩素(40μmol/L)对猪前体脂肪细胞增殖效应不明显(P>0.05),而低浓度的黄芩苷(20μmol/L)对猪前体脂肪细胞增殖有促进作用(P<0.05),随浓度升高促进作用减弱。3、研究黄芩素和黄芩苷对猪前体脂肪细胞分化的影响。采用油红O染色提取法、形态学观察法,检测脂肪细胞内甘油三酯积聚量的变化以及前体脂肪细胞充脂率、充脂程度及形态变化。结果表明,黄芩素和黄芩苷(40～320μmol/L)以剂量依赖性方式抑制猪前体脂肪细胞的分化,且黄芩苷的抑制作用稍强于黄芩素。4、研究黄芩素和黄芩苷对前体脂肪细胞分化相关基因转录及FAS酶活性的影响。采用半定量RT-PCR技术分析40μmol/L、160μmol/L两种浓度的黄芩素和黄芩苷对脂肪细胞分化特异转录因子PPARγ2、C/EBPα、生脂酶基因FAS及生长因子IGF-1等基因mRNA表达的影响;分光光度计法检测黄芩素对生脂酶FAS活性的影响。结果显示,黄芩苷可下调PPAR-γ2、FAS及IGF-1 mRNA的表达,但对脂肪细胞另一特异转录因子C/EBPαmRNA表达差异不显著(P>0.05),提示其抑制脂肪细胞分化可能与下调PPARγ2、FAS、IGF-1等基因mRNA表达有关,而与C/EBPα无关;而黄芩素除具有上述作用外,还可抑制FAS酶的活性。以上研究为黄芩素和黄芩苷调控体脂沉积提供了理论依据,并从细胞和分子水平,对其调控体脂作用机制、预防和治疗肥胖症、高血压、高血脂等相关疾病提供重要参考。