生命科学研究是21世纪最重要的科学研究,药物分析在生命科学研究中占有重要的地位。建立准确、灵敏度高、简便、快捷的药物活性成分提制分析和质量监控新方法对药理研究、临床医疗、药物分析有着重要意义。穿心莲作为常用中药,具有抗菌、消炎、抗癌等多种功效,药用价值极高。本文以穿心莲为研究对象,以现代新兴样品前处理技术为手段,从穿心莲中提取以内酯类和黄酮类为代表的活性成分,系统研究了诸因素对提取率的影响,以确定活性成分最优提取条件。同时建立了穿心莲药材指纹图谱质量控制标准,并对穿心莲黄酮类代表物质芦丁与DNA的相互作用机理进行了相关研究,以期为新药开发提供理论依据。具体内容如下:1.穿心莲中总黄酮的提制分析采用不同提取溶剂、提取方法、提取条件探索穿心莲总黄酮的最优提取工艺。结果表明:与常规提取方法相比,微波辅助提取法省时、溶剂耗费少、其总黄酮提取效率最高。通过正交试验对微波提取条件进行了优化,得到最佳提取条件为:用60%乙醇在固液比为1:15 g/mL的条件下提取6 min。研究采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH-黄酮体系显色,并用紫外可见分光光度法检测,线性回归方程为A = 4.975 C + 0.1162,相关系数r=0.9997,线性范围为0.0017-0.0800 mg/mL,总黄酮平均回收率为103.14%,RSD=3.66%(n=5),方法学考察结果证明其精密度及重现性良好。用所拟方法对不同产地的穿心莲生药材及不同厂家的穿心莲中成药进行了检测,结果表明:因产地相近,穿心莲生药材中总黄酮含量差异不大;但不同厂家生产的穿心莲中成药中总黄酮含量存在显著差异,因此需对穿心莲中成药进行质量控制以期达到其最大疗效。2.穿心莲中穿心莲内酯的提制分析将酶提取、微波辅助提取等新技术应用于穿心莲活性成分穿心莲内酯的提取,比较了微波辅助提取法、回流提取法、碱水提取法、超声提取法、室温冷浸提取法,发现微波辅助提取法提取效率相对较高。进一步研究发现将酶预处理技术应用于微波辅助提取方法后,其穿心莲内酯提取效率比单纯的微波辅助提取法更高。将单因素实验与正交试验相结合探索最佳提取条件。实验结果表明:在pH值为5.5,温度为40℃条件下,用1.5mL/g的纤维素酶水解1 h,后用70%乙醇在固液比为1:15 g/mL的条件下微波提取4min的提取效率最高。用反相高效液相色谱法测定穿心莲内酯的含量,其最佳色谱条件为:柱温25℃,流动相(经过脱气)为V(甲醇):V(水)=70:30,流速0.8 mL/min,进样量为10μL,线性回归方程为:Y=2.06624×108X-141773, r=0.9998,线性范围为0.0007-0.0076 mg,穿心莲内酯平均回收率为102.83%,RSD为1.15%(n=6),方法学考察结果证明其精密度及重现性良好。用所拟方法对不同产地的穿心莲生药材及不同厂家的穿心莲中成药进行了检测,结果表明:因产地相近,穿心莲生药材中穿心莲内酯含量差异不大;但不同厂家生产的穿心莲中成药中穿心莲内酯含量存在显著差异,因此需对穿心莲中成药进行质量控制以期达到其最大疗效。3.穿心莲二维指纹图谱的创建研究采用微波辅助提取法提取穿心莲活性成分,高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)对提取液在全波长扫描下进行检测,创建了包含色谱及光谱信息的穿心莲二维指纹图谱。同时结合相似度评价系统及聚类分析方法对穿心莲样品进行分析。结果表明采收期为8月和9月份的穿心莲指纹图谱与穿心莲共有模式相似度高。比较不同药用部位的穿心莲指纹图谱相似度,得到穿心莲叶与共有模式的相似度更高。最后比较不同产地穿心莲药材相似度,发现药材可根据相似度分为A、B两组,而A组均采自南方B组均采自北方,说明产地是影响穿心莲质量的重要因素。进行聚类分析发现根据欧氏距离的大小可将穿心莲生药材聚为两类,其产地分别为南方和北方,与相似度分析结果相同。同时对市售药材进行相似度分析及聚类分析发现有两种药材相似度较低,而聚类分析中它们与对照指纹图谱也难聚为一类,所以认为它们质量较差。建立的穿心莲二维指纹图谱可应用于穿心莲药材的质量监控。4. DNA与穿心莲活性小分子芦丁相互作用机理研究研究采用循环伏安法及紫外-可见分光光度法探测穿心莲中黄酮类活性成分芦丁与DNA相互作用机理。循环伏安法研究发现:引入DNA后,芦丁峰电流降低,峰电位正移,根据Bao X. Y理论推断芦丁与DNA在该条件下结合生成了一种非电活性的超分子化合物。同时紫外-可见吸收光谱法研究发现:引入DNA后芦丁的紫外可见吸收光谱图发生减色及红移现象,进而推断二者以嵌入式结合。综合两种方法,最后推断芦丁与DNA通过嵌入结合形成非电活性的超分子化合物。穿心莲之所以具有抗癌活性是因为二者形成的超分子化合物在碱基之间滑动,从而破坏了DNA的双螺旋结构,诱导DNA构象发生变化而显示出抗肿瘤和抗病毒活性。