甜菜夜蛾滞育激素-性信息合成激活肽(DH-PBAN)基因和促前胸腺激素(PTTH)基因的克隆和表达分析

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利用兼并引物分别扩增出甜菜夜蛾的促前胸腺激素(pmthoracicotropic hormone,PTTH)和滞育激素(diapause hormone,DH)cDNA,克隆和测序结果显示出PTTHcDNA包含一个编码226个氨基酸的开放阅读框:信号肽、一个未知肽和PTTH。和其它已知物种的PTTH比较,甜菜夜蛾和夜蛾科昆虫有较高的同源性,和其它昆虫的相似性稍低,但是PTTH分子中的7个半胱氨酸残基的位置是保守且一致的。用棉铃虫PTTH抗体进行整体免疫组织化学检测,发现PTTH在甜菜夜蛾脑中的两对神经分泌细胞中表达。Northern杂交表明PTTH mRNA约1.2 kb,特异表达在脑组织。半定量RT-PCR检测了PTTH在幼虫期和蛹期的发育变化,显示出PTTH表达和蜕皮变态有密切的关系,暗示PTTH在甜菜夜蛾行使其生物学功能很可能也是通过刺激前胸腺合成和分泌蜕皮激素来完成的。从甜菜夜蛾咽下神经节克隆到全长为798bD的DH cDNA,该基因开放阅读框编码197个氨基酸,包含DH、性信息素合成激活肽和3个功能未知的咽下神经节神经肽,它们的C末端都是保守的FXPR/KL(X=G、T、S)序列,和已知鳞翅目昆虫DH cDNA有较高同源性,且组织结构相同。Northern分析显示DH mRNA特异表达于咽下神经节,转录本为800bp,在幼虫和成虫中表达较高,可能和幼虫发育和刺激成虫分泌性信息素有关,暗示DH基因除了调节昆虫滞育外,可能有其它的生理功能。滞育激素和促前胸腺激素在非滞育昆虫甜菜夜蛾中均有表达,在时空上显出特定的表达模式,说明它们和生长发育相关。 对棉铃虫滞育蛹的抗寒机理的调查,发现海藻糖含量在滞育和非滞育棉铃虫蛹个体有显著差异。海藻糖是主要的昆虫血糖,海藻糖的合成依赖于6-磷酸海藻糖合成酶。据此,我们克隆了棉铃虫6-磷酸海藻糖合成酶cDNA,该cDNA全长1827 bp,开放阅读框编码536个氨基酸的合成酶,用家蚕杆状病毒体系表达6-磷酸海藻糖合成酶,成功获得具有酶活性的蛋白。对棉铃虫不同发育时期的血淋巴进行6-磷酸海藻糖合成酶酶活分析,发现酶活的变化趋势和血淋巴海藻糖含量的变化趋势基本一致:用Northem blot检测6-磷酸海藻糖mRNA的组织分布,其在滞育棉铃虫的脂肪体和卵巢中特异表达;RT-PCR分析其发育表达,结果和酶活及海藻糖含量变化吻合。
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