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猪流感(swine influence, SI)是由猪流感病毒引起猪的一种急性、热性、高度接触性呼吸道传染病,猪流感病毒主要包括H1N1, H1N2, H3N2等亚型A型流感病毒。猪作为人流感和禽流感病毒的中间宿主,被称为流感发生基因重排的“混合器”。猪流感的流行对感染猪群造成巨大的经济损失,并具有重要的公共卫生意义。本研究于2011年在江苏省扬州市某屠宰场采集猪鼻拭子433份和肺组织及肺门淋巴结各343份。共分离到6株猪流感病毒。对分离到的6株猪流感病毒进行HA及RT-PCR方法检测结果均为病毒阳性。同时本研究用广东2009年流行分离株甲型H1N1流感病毒作为免疫原,免疫6-8周龄BALB/C小鼠,取其脾与SP2/0细胞融合。细胞融合后同时用ELISA、IFA及HI三种方法检测筛选,经过多次克隆得到8株杂交瘤细胞,分别为：2B11、1B4、2C7、3A4、6A9、6B2、3B8、6D11。其中,2B11及6D11针对的是血凝素蛋白(HA),1B4、2C7及6A9针对的是神经氨酸酶(NA),3A4、6B2、3B8针对的是基质蛋白(M1)。8株单抗与分离的H1N1病毒均能产生不同类型的反应,而2B11,1B4,2C7,6A9,6D11与H5、H9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)、新城疫病毒(Newcastle disease, NDV)等病毒均不发生反应。用间接免疫荧光方法检测3A4,6B2,3B8与所有A型流感病毒均反应,与NDV不反应,荧光主要在细胞的胞浆内,而1B4、2B11、2C7、6A9、6D11的荧光主要在细胞膜周围。根据把株单抗的特性,我们挑选出3A4及1B4两株单抗建立了检测H1N1病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法。首先将单抗腹水用辛酸-硫酸钱沉淀法及亲和层析法进行纯化,根据两两配对筛选,最终选择以1B4作为捕捉抗体,3A4作为检测抗体。然后将3A4抗体用辣根过氧化物酶(HRP)标记。经过包被、封闭、二抗作用时间等条件的优化与筛选,最终建立了特异性好、灵敏度高的夹心ELISA方法,该检测方法与H5、H9亚型AIV、NDV等病毒均无交叉反应。用该方法检测了猪鼻棉拭50份及肺与肺门淋巴结组织样品各20份,表明以该方法检测结果与HI试验检测结果相符率为97.8%。我们建立的夹心ELISA为H1N1亚型猪流感的监测与诊断提供了一种更简单、快速、灵敏的检测方法。