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背景和目的：食管癌（esophageal carcinoma，EC）是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一，其发生、发展是多因素、多阶段共同作用的结果。近年来，随着分子生物学的深入发展，对食管癌形成的分子生物学机制有了一定的认识，但其确切的发病机制仍有待进一步探索。研究表明食管癌的发生与细胞的过度增殖有密切关系。核转录因子（nuclear transicription factor kappaB，NF-κB）是一类重要的核转录因子，其主要形式为p50和p65组成的二聚体，在细胞增殖的调控中起着非常重要的作用。NF-κB在Ras信号通路中充当Ras和CyclinD1的中介体。Ras的生长因子信号可激活细胞质中的NF-κB，使NF-κB从细胞质中转位于细胞核，与靶细胞CyclinD1的调节区结合，上调CyclinD1的表达，促进细胞周期从G0／G1期向S期转化，导致细胞增殖异常诱发肿瘤。周期素依赖性激酶（cyclin dependent kinases，CDKs）通过Cyclin-CDK-CDI网络调控细胞周期，CDK4蛋白是CDKs蛋白家族中的重要一员，其过表达可以引起细胞失控性生长，最终导致细胞恶性转化。环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）的过度表达可促进细胞增殖，抑制细胞凋亡，使细胞增殖和凋亡之间的平衡失调，从而促进肿瘤恶性行为的发生。用原位杂交方法检测食管鳞癌中NF-κBp50p65mRNA的表达，国内外文献尚未见报道，联合检测NF-κB p50p65、CDK4、COX-2蛋白在食管鳞癌中表达的研究，国内外文献也未见报道。为进一步探讨NF-κB p50p65基因与食管鳞癌发生和浸润转移的关系，寻求早期检测食管鳞癌发生和浸润转移的指标及寻找抑制食管鳞癌发生和浸润转移的有效方法，本文采用原位杂交及免疫组化SP法检测了49例食管鳞癌及食管癌旁粘膜组织中NF-κB p50p65mRNA和蛋白的表达情况；采用免疫组化SP法检测了49例食管鳞癌及癌旁粘膜组织中CDK4蛋白和COX-2蛋白的表达，并探讨了NF-κB p50p65、CDK4蛋白和COX-2蛋白的相互关系。材料与方法：1．标本：49例食管鳞癌组织标本收集自郑州大学第一附属医院2002年手术除标本，所有病例术前均无化疗、放疗及免疫治疗史。病理组织学证实49例食管癌均为鳞状细胞癌，其中Ⅰ级24例，Ⅱ级16例，Ⅲ级9例；淋巴结转移组23例，手术清扫的食管周围淋巴结中发现癌转移；无淋巴结转移组26例，食管周围淋巴结中未发现癌转移。浸润深度分两组。浅层组13例；深层组36例。每例标本均又取癌旁粘膜包括单纯增生上皮33例；轻度不典型增生19例；重度不典型增生14例，原位癌12例及正常食管上皮32例。2．方法：应用免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）SP法和原位杂交（in situ hybridization，ISH）方法检测49例食管鳞癌中NF-κB p50、p65蛋白和mRNA、CDK4蛋白和COX-2蛋白的表达。3．统计学处理：所有数据均采用SPSS 10.0软件分析，率的比较采用χ2检验；相关性检验用Spearman相关分析。检验水准α=0.05。结果：1．NF-κBp50蛋白在正常食管粘膜、单纯增生、轻度不典型增生、重度不典型增生、原位癌和浸润癌中的阳性率分别是28.1％（9／32）、30.3％（10／33）、47.4％（9／19）、50.0％（7／14）、33.3％（4／12）和55.1％（27／49），浸润癌组织与正常上皮、单纯增生比较差异均有显著性意义（P＜0.05）。NF-κBp65蛋白在正常食管粘膜、单纯增生、轻度不典型增生、重度不典型增生、原位癌和浸润癌中的阳性率分别是18.8％（6／32）、18.2％（6／33）、36.8％（7／19）、42.9％（6／14）、50.0％（6／12）和57.1（28／49）。浸润癌中NF-κB p65蛋白的表达与正常上皮、单纯增生比较差异均有显著性（P＜0.05）。p50蛋白在食管鳞癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中的阳性率逐渐增高，分别是37.5％、62.5％、88.9％，其差异有统计学意义（P＜0.05）；在浅层浸润组和深层浸润组中的阳性率分别是15.4％和69.4％，其差异有统计学意义（P＜0.05）；在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的阳性率分别是60.9％和50.0％，其差异无统计学意义（P＞0.05）；NF-κBp65蛋白在食管鳞癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中的阳性率逐渐增高，分别是41.7％、68.8％、77.8％，其差异无统计学意义（P＞0.05）；在浅层浸润组和深层浸润组中的阳性率分别是7.7％和75.0％，其差异有统计学意义（P＜0.05）；在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的阳性率分别是87.0％和30.8％，其差异有统计学意义（P＜0.05）。2．NF-κBp50mRNA在正常食管粘膜、单纯增生、轻度不典型增生、重度不典型增生、原位癌和浸润癌中的阳性率分别是21.9％（7／32）、24.2％（8／33）、31.6％（6／19）、42.9％（6／14）、41.7％（5／12）和53.1％（26／49），浸润癌中NF-κBp50mRNA的表达与正常上皮、单纯增生组相比差异均有显著性意义（P＜0.05）。NF-κBp65mRNA在正常食管粘膜、单纯增生、轻度不典型增生、重度不典型增生、原位癌和浸润癌中的阳性率分别是18.8％（6／32）、18.2％（6／33）、31.6％（6／19）、35.7％（5／14）、33.3％（4／12）和55.1％（27／49），浸润癌中NF-κBp65mRNA与正常上皮、单纯增生相比差异均有显著性意义（P＜0.05）。NF-κBp50mRNA在食管鳞癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中的阳性率逐渐增高，分别是37.5％、62.5％、77.8％，其差异无统计学意义（P＞0.05）；在浅层浸润组和深层浸润组中的阳性率分别是15.4％和66.7％，其差异有统计学意义（P＜0.05）；在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的阳性率分别是78.3％和30.8％，其差异有统计学意义（P＜0.05）；NF-κBp65mRNA在食管鳞癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中的阳性率逐渐增高，分别是45.8％、50.0％、88.9％，其差异无统计学意义（P＞0.05）；在浅层浸润组和深层浸润组中的阳性率分别是15.4％和69.4％，其差异有统计学意义（P＜0.05）；在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的阳性率分别是73.9％和38.5％，其差异有统计学意义（P＜0.05）。3．CDK4蛋白在正常上皮和单纯增生中的阳性率是9.4％（3／32）和24.2％（8／33），在轻度不典型增生、重度不典型增生、原位癌和浸润癌中的阳性率分别是42.1％（8／19）、64.3％（9／14）、66.7％（8／12）、77.6％（38／49），与正常上皮比较差异均有显著性意义（P＜0.05）。CDK4蛋白在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中的阳性率分别是66.7％、87.5％、88.9％，其差异无统计学意义（P＞0.05），但其阳性率有逐渐增高的趋势；在浅层浸润组和深层浸润组中的阳性率分别是46.2％和88.9％，其差异有统计学意义（P＜0.05）；在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的阳性率分别是95.7％和61.5％，其差异也有统计学意义（P＜0.05）。4．COX-2蛋白在正常上皮和单纯增生中的阳性率是0.0％（0／32）和6.1％（2／33），在轻度不典型增生、重度不典型增生、原位癌和浸润癌中的阳性率逐渐增高，分别是31.6％（6／19）、46.2％（6／14）、58.3％（7／12）、73.5％（36／49），与正常上皮比较差异均有显著性意义（P＜0.05）。COX-2蛋白在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中的阳性率分别是62.5％、81.3％、88.9％，其差异无统计学意义（P＞0.05），但其阳性率有逐渐增高的趋势；在浅层浸润组和深层浸润组中的阳性率分别是38.5％和86.1％，其差异有统计学意义（P＜0.05）；在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的阳性率分别是91.3％和57.7％，其差异也有统计学意义（P＜0.05）。5．NF-κBp50蛋白与CDK4蛋白、COX-2蛋白在食管鳞癌中的表达呈正相关关系（P＜0.05）；NF-κBp50mRNA与CDK4蛋白、COX-2蛋白在食管鳞癌中的表达也呈正相关关系（P＜0.05）；NF-κBp65蛋白与CDK4蛋白、COX-2蛋白在食管鳞癌中的表达呈正相关关系（P＜0.05）；NF-κBp65mRNA与CDK4蛋白、COX-2蛋白在食管鳞癌中的表达也呈正相关关系（P＜0.05）。6．CDK4蛋白表达和COX-2蛋白在食管鳞癌中表达呈正相关关系（P＜0.05），在38例CDK4蛋白阳性的病例中有33例COX-2蛋白表达阳性，在11例CDK4蛋白阴性的病例中有8例COX-2蛋白表达阴性。7．NF-κBp50和p65蛋白在食管鳞癌中表达呈正相关关系（P＜0.05），NF-κBp50和p65mRNA在食管鳞癌中表达呈正相关关系（P＜0.05）。NF-κBp50蛋白和mRNA在食管鳞癌中表达呈正相关关系（P＜0.05）。NF-κBp65蛋白和mRNA在食管鳞癌中表达呈正相关关系（P＜0.05）。结论1．食管鳞癌组织中NF-κB p50、p65蛋白及mRNA的阳性率均高于正常食管粘膜。在癌旁不典型增生组织中NF-κB p50、p65蛋白及mRNA的阳性率逐渐增高，提示NF-κB蛋白及mRNA表达增高与食管鳞癌发生、发展有关。2．NF-κB p50、p65蛋白及mRNA的阳性率均随癌组织浸润深度的加深而明显增高，在有淋巴结转移组癌组织均明显高于无淋巴结转移组癌组织，表明了NF-κB p50、p65基因参与食管鳞癌的局部侵袭和转移。3．CDK4蛋白、COX-2蛋白在食管鳞癌的高表达与其发生和浸润转移有关，其阳性率随癌组织分化程度的降低而增高，提示CDK4蛋白的表达与食管鳞癌分化程度呈负相关。4．NF-κB p50、p65蛋白及mRNA在食管鳞癌中的阳性率呈正相关关系，提示NF-κB p50、p65mRNA表达和蛋白表达具有一致性。NF-κB p50、p65与CDK4蛋白呈正相关关系，与COX-2蛋白也呈正相关关系。提示NF-κB p50、p65可能上调了CDK4蛋白和COX-2蛋白的表达。