水通道蛋白3和紧密连接蛋白的表达测定及在肠道屏障中的作用

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第一章概述了机体内蛋白质的结构、功能以及分类。简介了生物医学领域基于免疫标记理论测定特定蛋白质的方法、原理、优点以及实验优化等。综述了维护肠道屏障功能的重要蛋白质:水通道蛋白3和紧密连接蛋白的结构、研究进展。第二章水通道蛋白3是肠道调节水和小分子物质进出肠道的重要的蛋白质。脂多糖是肠道主要的病原体,损伤肠道的屏障功能。使用脂多糖作用于肠道上皮细胞后采用免疫印迹法测定肠道上皮细胞中水通道蛋白3蛋白质表达的变化,采用聚合酶链反应测定水通道蛋白3的mRNA的表达变化。结果显示脂多糖干扰组较空白对照组水通道蛋白3表达明显下调,其下调水平随脂多糖浓度以及时间增多而下降更加显著。进一步实验发现脂多糖作用于肠道上皮细胞采用免疫印迹法测定总p38、磷酸化p38、总JNK、磷酸化.JNK的活性明显升高,这一升高的表现能够被p38的抑制剂SB203580、JNK的抑制剂SP600125所阻断。验证了p38和JNK信号通路参与调节了脂多糖作用结肠上皮细胞后水通道蛋白3的下调。第三章酪酸梭菌是肠道重要的益生菌之一,维持肠道屏障功能。本文在脂多糖作用肠道上皮细胞的基础上,加入酪酸梭菌上清液后采用免疫印迹法和聚合酶链反应测定水通道蛋白3蛋白和mRNA基因表达。发现酪酸梭菌能够改善脂多糖作用后水通道蛋白3表达下调,而且改善作用随酪酸梭菌浓度和时间的增多而作用增强。进一步实验发现酪酸梭菌作用于肠道上皮细胞采用免疫印迹法测定总p38、磷酸化p38、总JNK、磷酸化JNK的活性明显升高,这一升高的表现能够被p38的抑制剂SB203580、JNK的抑制剂SP600125所阻断。验证了p38和JNK信号通路参与调节了酪酸梭菌作用结肠上皮细胞后水通道蛋白3的上调作用。第四章紧密连接蛋白是肠道屏障功能的另一重要蛋白质。脂多糖作用于肠道上皮细胞后通过免疫印迹法测定肠道上皮细胞中紧密连接蛋白在脂多糖的作用后蛋白质表达的变化,采用聚合酶链反应测定紧密连接蛋白的mRNA的表达变化。并使用tranwells法测定肠道上皮细胞的渗透性。结果发现脂多糖作用于肠道上皮细胞后紧密连接蛋白质的蛋白表达和mRNA表达下调,肠道渗透性升高。随着脂多糖作用浓度增多和时间延长,紧密连接蛋白表达下调逐渐显著,而肠道渗透性逐渐升高。揭示脂多糖通过下调紧密连接蛋白进而损伤肠道屏障功能的。第五章 在实验发现脂多糖下调肠道上皮紧密连接蛋白的基础上,进一步加用酪酸梭菌作用肠道上皮细胞后,通过免疫印迹法测定肠道上皮细胞中紧密连接蛋白在酪酸梭菌的作用后蛋白质表达的变化,采用聚合酶链反应测定紧密连接蛋白的mRNA的表达变化。并使用tranwells法测定肠道上皮细胞的渗透性。结果发现酪酸梭菌改善脂多糖引起的紧密连接蛋白表达的下调;改善脂多糖所致的肠道上皮细胞渗透性的升高。揭示了酪酸梭菌通过上调紧密连接蛋白维护肠道的屏障功能的。
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