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目的1采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)技术分别检测119例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者原发灶及71例转移灶组织中EML4-ALK (echinoderm microtubule-assciated protein-like4 anaplastic lymphoma kinase, EML4-ALK)融合基因阳性表达情况。2对其中15例既有原发灶癌组织又有转移灶癌组织的NSCLC患者,同时检测NSCLC原发灶和转移灶组织中EML4-ALK融合基因,探讨表达一致性情况。3结合患者的基线资料,分析NSCLC原发灶组织和转移灶组织中EML4-ALK融合基因阳性表达情况与临床病理、血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)含量水平之间的关系。方法1收集2013年2月至2014年11月北京军区总医院、中国人民解放军总医院附属304医院经病理学确诊的119例NSCLC患者原发灶及71例转移灶新鲜组织或者石蜡组织标本,其中对15例患者既收集了原发肺组织标本也收集了转移灶组织标本。同期收集所有患者(除去配对的15例,共175例)的血清标本。2利用qRT-PCR技术分别对119例NSCLC原发灶及71例转移灶组织中EML4-ALK融合基因的阳性表达情况进行检测,分析患者的临床病理特征与EML4-ALK融合基因的阳性表达是否有关。3采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测175例NSCLC患者血清VEGF含量,分析EML4-ALK融合基因状态与血清VEGF的关系。结果1 NSCLC患者原发灶及转移灶肿瘤组织中EML4-ALK融合基因阳性表达情况175例NSCLC患者组织标本中,13例呈EML4-ALK融合基因阳性,阳性率为7.4%(13/175)。119例NSCLC原发灶组织中检测出10例EML4-ALK融合基因表达阳性,阳性率为8.4%(10/119)。71例NSCLC转移灶组织中检出5例EML4-ALK融合基因表达阳性,阳性率为7.1%(5/71)。转移灶组织中包括40例淋巴结组织,10例脑组织,10例骨组织,8例体表软组织,1例肝组织,1例结肠组织以及1例胸膜组织,其中淋巴结、骨、脑和胸膜组织中检测出融合基因,其阳性表达率分别为2.5%(1/40)、20%(2/10)、10%(1/10)、和100%(1/1)。2 NSCLC患者原发灶及转移灶组织中EML4-ALK融合基因状态与患者临床病理特征的关系(1)119例NSCLC患者原发灶组织中EML4-ALK融合基因阳性率在吸烟组和不吸烟组中分别为1.8%和14.3%(P=0.034),在腺癌组和非腺癌组分别为14.1%和1.9%(P=0.044),两者差异均有统计学意义；在男性组和女性组中分别为5.1%和11.7%(P=0.335)；在年龄>60岁组和年龄≤60岁组分别为6.6%和10.3%(P=0.679)；在低分化组和中高分化组分别为4.0%和11.6%(P=0.255)；在Ⅰ-Ⅱ期组和Ⅲ-Ⅳ期组分别为7.5%和8.9%(P=0.547),统计学分析均无差异(P>0.05)。(2)71例NSCLC患者转移灶组织中EML4-ALK融合基因阳性率在吸烟组和不吸烟组分别为3.4%和9.5%；腺癌组和非腺癌组分别为7.4%和5.9%；男性组和女性组分别为7.5%和6.5%；年龄>60岁组和≤60岁组分别为6.7%和7.3%；低分化组和中高分化组分别为6.3%和7.7%；在Ⅲ期和Ⅳ期分别为13.3%和5.4%；统计学分析结果均无差异(P>0.05)。3NSCLC患者组织中EML4-ALK融合基因与血清VEGF含量水平的关系175例NSCLC患者的血清(除去15例配对)VEGF值明显高于参考值上限,并且Ⅰ-Ⅱ期NSCLC患者为177.42±81.88pg/ml, (?)-Ⅳ期为381.74±145.06pg/ml,血清VEGF含量在两组间差异有统计学意义(P<0.05)。119例NSCLC原发灶组织中,10例EML4-ALK融合基因阳性和109例EML4-ALK融合基因阴性患者的血清VEGF的含量分别为346.92±111.25pg/ml、393.59±102.94pg/ml; 71例NSCLC转移灶组织中,5例EML4-AL K融合基因阳性和66例EML4-ALK融合基因阴性患者血清VEGF的含量分别为403.31±128.73pg/ml、363.88±108.30pg/ml,统计学分析显示EML4-ALK融合基因与血清VEGF含量无关(P均>0.05)。4 NSCLC患者配对组织中EML4-ALK融合基因的表达一致性15例原发肺组织配对9例淋巴结组织,2例脑组织,2例骨组织、1例胸膜组织和1例体表软组织。15例配对标本中,检测出2例原发肺组织及配对的转移灶组织(胸膜组织1例、骨组织1例)中EML4-ALK融合基因均为阳性,阳性一致率为100%(2/2),余下的13例配对组织中EML4-ALK融合基因均为阴性,阴性一致率亦为100%(13/13)。两例EML4-ALK融合基因阳性患者分别为57岁和71女性、不吸烟、腺癌或含腺癌成分的NSCLC患者。结论1使用qRT-PCR技术能准确反映EML4-ALK融合基因存在状态,NSCLC患者EML4-ALK融合基因总体阳性率为7.4%,原发灶组织和转移灶组织中阳性率分别为8.4%和7.1%,后者略低于原发灶肿瘤组织标本。配对标本结果显示NSCLC原发灶组织和转移灶组织中EML4-ALK融合基因表达情况一致,提示在原发灶肿瘤组织难以获取时,可以对其转移灶肿瘤组织进行检测,为NSCLC患者使用ALK抑制剂提供依据。2 NSCLC患者原发灶肿瘤组织中EML4-ALK融合基因的表达与患者的病理类型和吸烟史有关,主要见于腺癌和不吸烟者,而与患者的性别、年龄、分化程度、分期无明显相关,提示了EML4-ALK融合基因阳性的中国NSCLC患者的临床病理特点。3NSCLC患者血清VEGF含量较参考值明显升高,且与NSCLC分期有关,分期越晚,血清VEGF含量越高。同时该研究结果显示NSCLC患者肿瘤组织中EML4-ALK融合基因阳性与否与血清VEGF含量无明显相关,间接提示了这两条信号通路在NSCLC发生、发展过程中,相互之间关联可能较少。