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【摘要】目的：表达纯化并初步鉴定癸异戊烯磷酰基β-D-2’-差向异构酶亚单位DprE1，为构建DprE1抑制剂的筛选模型，发现作用于DprE1靶点的全新作用机制的抗结核化合物奠定基础。方法：以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,克隆基因DprE1构建重组表达质粒pET16b::DprE1；IPTG诱导表达并经Ni2+亲和层析柱纯化得到具有酶活性的癸异戊烯磷酰基β-D-2’-差向异构酶亚单位DprE1；基于该酶促反应底物FAD在450nm波长下具有光吸收的原理,初步鉴定该酶的活性。结果：成功获得具有一定酶活性的癸异戊烯磷酰基β-D-2’-差向异构酶亚单位DprE1。结论：成功得到具有一定酶活性的癸异戊烯磷酰基β-D-2’-差向异构酶亚单位DprE1,初步鉴定了该酶的活性，为获得全新作用靶点的新型抗结核药物奠定基础。目的：评价滚环扩增技术(Rolling CircleAmplification, RCA)对痰标本中结核分枝杆菌利福平敏感性的直接快速检测效果。方法：选取首都医科大学附属北京胸科医院住院的初治和复治涂阳肺结核患者24小时痰标本32份，采用RCA法、直接测序法及传统药敏试验绝对浓度法测定痰标本中结核分枝杆菌对利福平的敏感性，并进行了比较。结果：32份痰标本中结核分枝杆菌，采用RCA法24株可检测到rpoB基因突变，其中23株单位点突变(516位2株，526位12株，531位9株)，1株516位和526位联合突变，与直接测序结果均一致。32份痰标本的RCA方法检测与DNA测序结果和药物敏感性试验进行对比，28株结果均一致。4株结果不一致，其中2株RCA及测序无突变，药敏结果显示为耐药；2株RCA及测序显示有突变，药敏结果显示为敏感。结论：RCA法用于痰标本中直接检测结核分枝杆菌对利福平的敏感性，同直接测序法结果一致，同传统药敏试验相比，RCA法能够大幅度节省时间，具有很好的临床应用和推广前景。