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杜仲(Eucommia ulmoides Oliv)为我国特有的杜仲科杜仲属植物,是一种名贵的滋补中药材,传统以杜仲树皮入药。现代研究发现,杜仲叶也具有很高的药用价值,杜仲叶和树皮现均收载于《中国药典》(2010年版一部),具有补肝肾、强筋骨和降血压等功效。药材活性成分含量是衡量中药材质量优劣的重要指标,不同时期杜仲叶中有效成分的含量会出现变化,而生长季节,采收时间,气候条件等因素都会对活性成分含量产生不同程度的影响,了解杜仲叶不同发育阶段活性成分含量的变化规律并适时采收才是保障和提高中药材产量和质量的关键。杜仲叶提取物是由杜仲叶经提取精制等步骤制备而成,由于杜仲品种、产地、光照、土壤、田间管理、采收加工、炮制等因素,对杜仲质量均有影响。为了获得优质杜仲叶药材,本文以杜仲叶4种活性成分为指标研究了杜仲叶中主要活性成分的积累规律,寻找最佳采收期,对杜仲叶提取物的制备工艺和质量控制方法进行了研究。通过3批中试试验制备了杜仲叶提取物。本文研究结果如下:一、建立了HPLC法测定杜仲叶中活性成分的含量测定方法,采用变换波长和梯度洗脱HPLC法测定。最佳色谱条件是:色谱柱:Thermo Hypersil Gold C18(250mm×4.6mm×5μm);以甲醇为流动相A,以0.5%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱;流速:1.0m L/min;(0~30 min,A:5%→10%,B:95%→90%;30~70 min,A:10%→25%,B:90%→75%);检测波长为206 nm(0~15 min),236 nm(15~55 min);体积流量1.0 m L/min。结果显示:不同采摘期的杜仲叶中桃叶珊瑚苷、绿原酸、车叶草苷、京尼平苷酸的含量差异很大,若以绿原酸为采收指标,则杜仲叶的最佳采收期为5月底至6月初;若以环烯醚萜类(桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、车叶草苷)为采收指标,则杜仲叶最佳采收期为5月底至6月上旬;综合考虑杜仲叶干物质产量和活性成分含量,杜仲叶最佳采收期也是5月底至6月上旬。二、杜仲叶提取物制备条件的优选:用闪式提取器提取杜仲叶,喷雾干燥法制得杜仲叶提取物,用高效液相色谱法测定杜仲叶中活性成分的含量。结果显示提取物中桃叶珊瑚苷、绿原酸、车叶草苷、京尼平苷酸的平均含量高于杜仲叶的4倍左右。三、杜仲叶中活性成分的简单纯化:采用HPD100大孔吸附树脂吸附,用蒸馏水和50%乙醇以2.0m L/min的流速进行洗脱,收集水洗脱液和乙醇洗脱液,测定桃叶珊瑚苷、绿原酸、车叶草苷、京尼平苷酸的含量。结果显示杜仲叶提取物过柱后含量比过柱前活性成分提高2-4倍。