【摘 要】
：
目的:通过在小鼠睾丸支持细胞中过表达Foxo1,探究Foxo1在小鼠性腺体细胞的命运维持中发挥的作用。方法:1.利用CRISPR-Cas9技术,将磷酸化位点突变的Foxo1基因插入Rosa26区域,构建Foxo1在睾丸支持细胞中持续性表达的小鼠模型,设置对照组（Control）以及实验组（Foxo1-7mu;Sf1-Cre）,每组设置3个生物学重复（n=6）。2.对4M小鼠睾丸组织进行FOXO1与
【基金项目】
：
国家杰出青年科学基金（81525011）； 国家自然科学基金项目（31471348、31671496）；
论文部分内容阅读
目的:通过在小鼠睾丸支持细胞中过表达Foxo1,探究Foxo1在小鼠性腺体细胞的命运维持中发挥的作用。方法:1.利用CRISPR-Cas9技术,将磷酸化位点突变的Foxo1基因插入Rosa26区域,构建Foxo1在睾丸支持细胞中持续性表达的小鼠模型,设置对照组（Control）以及实验组（Foxo1-7mu;Sf1-Cre）,每组设置3个生物学重复（n=6）。2.对4M小鼠睾丸组织进行FOXO1与WT1免疫组织荧光共定位染色,验证FOXO1在支持细胞被激活,小鼠模型构建成功。3.收集6M、2M、3W、2W、1W小鼠基础数据（小鼠体重和睾丸重量）和睾丸组织进行表型分析;检测6M和2M小鼠附睾内精子数量,同时进行生育力检测。4.通过H＆E染色以及MVH、SOX9的免疫组织化学染色,检测支持细胞过激活Foxo1对生精细胞和支持细胞的影响。5.TUNEL法检测FOXO1持续性表达对6M和2M小鼠睾丸组织细胞凋亡的影响。6.体外培养2W的实验组及对照组小鼠睾丸支持细胞,培养48h后用Tris-Hcl进行处理,去除多余的生精细胞,24 h后用0.25%胰酶消化支持细胞,进行细胞计数,以每孔20,000个细胞种到7个24孔板中,每天同一时间进行MTT检测,检测490 nm处的吸光度,绘制细胞增殖曲线,通过Hoechst染核结合流式分析,检测Foxo1过激活小鼠的支持细胞细胞周期是否有异常。7.提取体外培养的支持细胞的总蛋白,采用Western Blot检测FOXL2、SOX9、WT1以及GAPDH的蛋白水平;RT-PCR检测Foxl2、Wnt4、Dax-1、Sox9、Dmrt1及Amh的表达情况;免疫组织化学检测2W及3W的Foxo1-7mu;Sf1-Cre小鼠睾丸组织FOXL2的表达情况。结果:1.Foxo1-7mu;Sf1-Cre小鼠可以正常存活,发育没有明显异常。在FOXO1与WT1的免疫荧光共染中,WT1阳性的支持细胞中可见明显的FOXO1核定位信号,表明FOXO1在支持细胞被激活,小鼠模型构建成功。2.与对照组相比,Foxo1-7mu;Sf1-Cre小鼠睾丸发育异常,睾丸形态明显缩小,生殖细胞大量丢失,附睾内精子数量严重减少,生育力低下。3.对Foxo1-7mu;Sf1-Cre小鼠睾丸组织进行TUNEL检测,发现支持细胞中FOXO1的持续性激活会导致睾丸曲细精管内细胞凋亡的增加。4.对体外培养的支持细胞进行7天的MTT增殖检测发现Foxo1-7mu;Sf1-Cre小鼠的支持细胞与对照组相比增殖减缓,细胞周期阻滞在G0/G1期。5.Foxo1-7mu;Sf1-Cre小鼠的支持细胞中雄性特异性基因Dmrt1、Amh表达量下降,同时开始表达颗粒细胞特异性基因Foxl2。结论:支持细胞持续性表达FOXO1会导致雄性小鼠睾丸明显缩小,精子数量显著降低,失去对生精细胞的支持作用,同时支持细胞转变为颗粒细胞样细胞,因此FOXO1在支持细胞的谱系维持中发挥重要作用。
其他文献
近年来国内财产保险市场取得了突飞猛进的发展,但市场环境的复杂万变以及行业竞争的升级加速对财险公司的经营管理水平提出了更高的要求。人保财险秦皇岛市分公司经过多年实践初步构建了较为完善的全面预算管理体系并取得了一定的效果,但在实际运用中仍然存在很多问题,导致预算实施效果不佳。因此如何对全面预算管理体系进行优化从而发挥更大的作用是一个值得深入研究的课题。首先,本文介绍了国内外有关全面预算管理的概念和理论
目的:本研究旨在探讨多巴胺D4受体基因（Dopamine Receptor D4 gene,DRD4）rs1800955单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）对注意缺陷多动障碍（attention deficit hyperactivity disorder,ADHD）儿童静息态脑功能的影响,并进一步探索脑功能与工作记忆的相关性,为ADHD病因学研究
目的:描述ICU老年重症患者衰弱患病率,探索衰弱对ICU老年重症患者临床诊疗及短期预后的影响。方法:本研究采取前瞻性研究方法,收集2020年11月至2021年11月于遵义医科大学附属医院重症监护病房治疗的老年患者临床资料,包括ICU老年重症患者的一般人口学特征、合并症、ICU主要诊断、临床衰弱量表（Clinical Frailty Scale,CFS）、Charlson合并症指数（Charlson
目的:本研究旨在探索肺叶切除术后CAP患者的咳嗽程度与肺动脉收缩压改变的相关性,为临床提供干预肺叶切除术后咳嗽的新的策略,以改善患者术后咳嗽症状,为患者提供更好的胸外科术后快速康复体验。方法:前瞻性研究分析成都大学附属医院2020.07-2021.08胸心外科收住的行胸腔镜下肺叶切除术的发生术后持续咳嗽的患者42例。随访并收集患者的基本临床资料、咳嗽评分（VAS及LCQ-MC）以及超声心动图,并将
目的:研究4-BDE对睾丸支持细胞凋亡的影响,探讨Fas/Fasl信号通路在4-BDE诱导睾丸支持细胞凋亡中的相互调控作用机制,为4-BDE导致雄性生殖毒性提供理论与实验依据。方法:1.选取不同浓度的4-BDE染毒大鼠睾丸支持细胞24h,用CCK-8法检测细胞存活率,选取合适的4-BDE浓度（低、中、高浓度组）,并设定空白组和DMSO溶剂组;2.流式细胞仪检测Annexin V-FITC/PI双染
茶文化旅游既是文化和旅游活动的融合，也是茶业和旅游两大产业的融合。全域旅游为文旅融合、产业融合提供了有力的政策驱动，推动了旅游业的提质增效。文章探讨了安徽省茶文化旅游发展的优势与不足，从品牌定位、品牌设计和品牌营销三个方面提出了安徽省茶文化旅游品牌构建的路径与策略。
目的:基于静息态功能磁共振成像（rs-f MRI）研究常规MRI阴性的儿童及青少年特发性全面性癫痫（IGE）脑动态功能网络连接变化,探讨动态功能网络连接指标（时间分数、平均停留时间及转换次数）与临床变量（年龄、病程及智商）之间的相关性,为IGE患者脑功能改变及认知功能障碍提供影像学依据。方法:收集2014年4月至2021年8月就诊于遵义医科大学附属医院儿科门诊及住院部确诊IGE且颅脑常规MRI检查
有机半导体具有质量轻、柔性、分子结构多样易变和可大面积制备的优点。它作为活性层可广泛应用于有机场效应晶体管（Organic Field-Effect Transtistor,OFET）、有机太阳能电池（Organic Photovoltaic,OPV）和有机发光二极管（Organic Light-Emitting Diode,OLED）等领域,因此,备受学术界和商业界的关注。目前,OLED已经商业
深入推进职业教育产教融合，保障产业链上游人力资源供给质量，需要校企协同育人走深、走实。文章从高职院校企业冠名班培养的连锁门店店长胜任力角度，分析店长岗位胜任力不足的表现及原因，对照店长胜任力模型给出了提升校企联合培养的店长胜任力的对策，通过发挥企业—学校双主体作用，高效利用“校中厂”，加强表达与沟通能力培养，强化服务营销意识培养，增加过程性评价指标体系等，尝试对校企协同育人的培养模式和培养质量提出
浮游植物是水生生态系统的初级生产者和食物链的基础环节,浮游植物的群落结构、丰度、优势种、生物量以及发生水华的范围和强度,都是分析水环境变化的重要指标。南水北调工程对尔王庄水库生态环境的未来影响短期内无法预料,南方物种随水入库的影响亟待进行前瞻性研究和预测。因此,在南水北调水体导入尔王庄水库的初始阶段,研究水库水质和浮游植物现状非常有必要。本研究自2018年3月到12月通过对尔王庄水库浮游植物功能群