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高等哺乳动物组织再生的能力非常有限,而哺乳动物的肝脏却具有非常强大的再生能力,一般情况下,人的肝脏在受损后3天之内启动肝再生,2-3周后肝脏功能基本恢复,3-6个月后肝脏大小可恢复到与受损前一样。肝脏损伤及其再生的分子生物学机制一直是人们研究的热点课题之一。我国是一个肝病大国,肝炎、肝硬化与肝癌在我国发病率高、危害严重,患病人数在1.2亿左右,因而深入研究肝细胞损伤与再生的分子生物学机制,开发治疗肝损伤的药物,具有十分重要的社会意义。 有关肝再生调控的研究已有70多年的历史,1931年Higgins等首先全面描述了大鼠部分肝切除后的再生过程,1975年Le Brecque等首次证实在哺乳期的肝脏或肝部分切除的肝脏中,存在一种特异性刺激肝细胞DNA合成的物质,命名为HSS。近30年来,国内外学者围绕肝再生的机制,对动物源及人源的HSS作了大量深入的研究。我们实验室从上世纪80年代开始致力于肝刺激物的分离纯化研究,获得了一种对CCl4引起的肝损伤具治疗作用的组分,命名为人肝细胞生成素(hepatopoietin,HPO),并于1995年获得美国专利。最近,本室崔春萍博士等从新生小牛肝脏中分离得到了三个具有体外促进肝癌细胞增殖的蛋白质,Q-TOF质谱测序鉴定出其中之一是一个富亮氨酸的酸性核蛋白(Leucine-rich acidic nuclear protein,LANP),其同源的人源体是pp32。pp32是一个多功能的酸性核蛋白,在正常组织可自我更新的细胞和肿瘤组织中都有较高水平的表达。研究发现其在细胞的信号转导、转录调控、细胞骨架动力学以及形态发生等过程中都参与作用,但体外促进肝细胞增殖方面目前没有报道。 本研究为进一步验证该蛋白的促增殖活性并对其作用机理作更加深入的研究,需要在体外获得大量高纯度的活性蛋白。首先我们分别从人胎肝cDNA文库和HL-60细胞中扩增该基因,测序结果显示由HL-60细胞获得的基因与文献报道的pp32完全一致,从cDNA文库中调取的核苷酸序列与pp32不完全一致,而