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目的:探讨醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate,MPA)、蛋白酶体抑制剂(Z-LLL-CHO,MG132)单独及联合应用对不同PR表达卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响及相关机制,为卵巢癌的临床治疗提供新的实验依据。方法:选取人卵巢癌细胞系HO-8910(PR高表达)、SKOV3(PR低表达)为研究对象。(1)不同浓度的MPA(0、1、20、50、100μmol/L)、MG132(0、1、2.5、5、10μmol/L)单独干预24-72 h,分别于24 h、48 h、72 h采用CCK8法检测两种细胞的增殖情况。(2)取呈对数生长的两种细胞分为:空白对照组(0μmol/L)、MG132组(5μmol/L)、MPA组(100μmol/L)、MG132+MPA组(5+100μmol/L),均作用24 h:a、采用CCK8法检测两种细胞的增殖情况;b、倒置显微镜观察细胞的形态学变化并摄片;c、采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪检测药物作用前后细胞的凋亡情况;d、利用免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)检测药物作用前后PR的表达情况;e、利用免疫印迹法(Westeron blot,WB)检测药物作用前后孕激素受体亚型PRA、PRB的表达情况。结果:(1)CCK8结果显示:MPA组(不同浓度)的HO-8910细胞存活率(%)分别为:(作用24 h)100.00±5.47、101.65±5.24、86.52±0.89、77.38±0.94、63.05±3.60;(作用48 h)100.00±0.94、104.45±0.37、71.06±3.22、55.70±0.74、48.08±0.08;(作用72 h)100.00±0.38、105.52±2.15、58.63±0.21、43.30±0.57、29.43±0.39。MPA组(不同浓度)的SKOV3细胞存活率(%)分别为:(作用24 h)100.00±3.46、101.53±3.3、95.39±2.02、89.15±2.51、84.49±2.29;(作用48 h)100.00±2.70、99.58±0.29、89.22±1.67、86.37±0.22、78.44±5.08;(作用72 h)100.00±3.59、103.22±6.12、87.21±3.32、78.68±3.30、65.56±0.79。20-100μmol/L的MPA对HO-8910细胞的增殖抑制作用明显强于SKOV3细胞且细胞存活率均呈剂量-效应和处理时间-效应依赖性下降。MG132组(不同浓度)的HO-8910细胞的存活率(%)分别为:(作用24 h)100.00±1.30、98.73±1.09、83.29±0.43、71.36±3.10、66.54±8.33;(作用48 h)100±0.06、89.35±2.05、73.39±1.86、59.46±0.69、47.40±0.98;(作用72 h)100±2.70、79.67±2.80、54.72±3.56、48.42±0.20、34.90±0.25。MG132组(不同浓度)的SKOV3细胞的存活率(%)分别为:(作用24 h)100.00±4.58、94.39±4.33、86.12±3.18、75.73±2.57、61.41±1.11;(作用48 h)100.00±3.40、80.18±2.73、62.11±3.89、51.76±3.99、46.97±1.75;(作用72 h)100.00±0.35、62.86±8.79、62.86±8.79、43.39±2.10、37.36±0.36、29.18±1.62。1-10μmol/L的MG132对HO-8910细胞和SKOV3细胞的增殖抑制作用相似且细胞存活率均呈剂量-效应和处理时间-效应依赖性下降。HO-8910细胞中,MG132和MPA联合用药组的细胞存活率(62.43%±3.56%)与单用MPA组的细胞存活率(63.05%±3.60%)相比差异无统计学意义(P>0.05),但在SKOV3细胞中MG132和MPA联合用药组的细胞存活率(65.52%±1.52%)明显低于单用MPA组的细胞存活率(84.49%±2.29%),差异有统计学意义(p<0.05)。(2)细胞形态学观察:control组细胞呈典型的上皮样细胞特征,以类椭圆形及长梭形为主,铺路石样生长,细胞排列规则紧凑;MG132组细胞数目减少,细胞间隙增大,视野内见较多漂浮细胞,部分细胞体积变大,伪足细长,胞浆内出现空泡;MG132+MPA组细胞数目减少更明显,视野内见大量漂浮细胞,胞浆内的空泡更多;两者MPA组细胞形态存在明显差异,HO-8910细胞MPA组细胞改变与MG132组细胞改变相似,而SKOV3细胞MPA组细胞数量稍减少,细胞排列较紧凑,部分细胞伸出伪足,呈多角形,未见明显漂浮细胞及胞浆内空泡。(3)流式细胞术结果显示:HO-8910细胞中各组细胞凋亡率(%):control组0.42±0.04、MG132组7.49±0.83、MPA组11.95±0.52、MG132+MPA组12.54±0.42;SKOV3细胞中各组细胞凋亡率(%):control组0.64±0.06、MG132组7.29±0.41、MPA组6.37±0.54、MG132+MPA组14.67±0.65;联合用药时,SKOV3细胞中,MG132+MPA组细胞凋亡率明显大于单用MPA组(p<0.05),但在HO-8910细胞中,MG132+MPA组凋亡率与单用MPA组相比,差异无统计学意义(p>0.05)。(4)免疫组化法结果显示:PR于胞核表达丰富,胞浆也可见表达,HO-8910细胞中PR高表达,SKOV3细胞中PR低表达。两种细胞中MG132组、MG132+MPA组PR表达均高于control组(p<0.05),而MPA组PR表达与control组相比,差异无统计学意义(p>0.05)。(5)免疫印迹法结果显示:HO-8910、SKOV3细胞中PRB的表达明显高于PRA。MG132组、MG132+MPA组PRB、PRA的表达均高于control组(p<0.05),而MPA组PRA、PRB的表达与control组相比,差异无统计学意义(p>0.05)。结论:(1)MPA对PR高表达细胞株HO-8910的增殖抑制及诱导凋亡作用明显强于PR低表达细胞株SKOV3。(2)MG132对HO-8910、SKOV3均具有增殖抑制及诱导凋亡的作用,并可增强MPA对SKOV3细胞增殖抑制及诱导凋亡作用的敏感性。(3)MG132增强MPA对SKOV3细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用可能与其提升PR的表达有关。