【摘 要】
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目的:观察Tap63对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）诱导的帕金森细胞模型中Bcl-2（B细胞淋巴瘤-2蛋白）、Bax（Bcl-2相关x蛋白）、Mcl-1（髓样细胞白血病-1蛋白）表达的影响,进而探讨Tap63在帕金森病凋亡机制中的作用。方法:将小鼠神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y细胞）依据不同处理方法分为4组:（1）空白对照组:无任何干预措施;（2）MPP+处理组:向培养基中SH-SY5Y
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目的:观察Tap63对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）诱导的帕金森细胞模型中Bcl-2（B细胞淋巴瘤-2蛋白）、Bax（Bcl-2相关x蛋白）、Mcl-1（髓样细胞白血病-1蛋白）表达的影响,进而探讨Tap63在帕金森病凋亡机制中的作用。方法:将小鼠神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y细胞）依据不同处理方法分为4组:（1）空白对照组:无任何干预措施;（2）MPP+处理组:向培养基中SH-SY5Y细胞加入10μmol·L-1MPP+持续作用24小时;（3）Tap63-NC+MPP+处理组:用携带无义序列的慢病毒颗粒持续转染48h,换液后加用10μmol·L-1的MPP+持续作用24h。（4）Tap63过表达+MPP+处理组,使用携带Tap63过表达基因的慢病毒颗粒持续转染48h,换液后加用10μmol·L-1MPP+持续作用24h。再将四组细胞分别提取蛋白,并进行Western-blot实验及流式细胞术实验,用于检验四组细胞中Bcl-2、Bax、Mcl-1的表达情况及各组凋亡细胞比例。用Image J测量蛋白条带灰度,并用Graphpad prism 9进行数据统计。结果:蛋白质印迹结果显示:与对照组（1.171±0.123）相比,MPP+处理组（0.871±0.084,t=4.951,p＜0.01）中Tap63蛋白表达降低,差异有统计学意义;与Tap63-NC+MPP+组（0.85±0.097）相比,Tap63过表达+MPP+处理组（1.073±0.135,t=3.301,p＜0.01）Tap63蛋白表达升高,差异有统计学意义。与对照组（Bax:0.968±0.051、Bcl-2:1.156±0.114、Mcl-1:2.065±0.102）相比,MPP+处理组（Bax:1.543±0.013,t=9.684,P＜0.01;Bcl-2:0.949±0.075,t=3.69,P＜0.01;Mcl-1:1.717±0.157,t=4.543,P＜0.01）Bax表达水平上升;Bcl-2及Mcl-1表达水平下降,差异有统计学意义。与Tap63-NC+MPP+组（Bax:1.549±0.115、Bcl-2:0.961±0.087、Mcl-1:1.678±0.149）相比,Tap63过表达+MPP+处理组（Bax:0.913±0.049,t=12.48,P＜0.01;Bcl-2:1.086±0.098,t=2.34,P＜0.05;Mcl-1:1.918±0.094,t=3.331,P＜0.01）的Bax表达水平下降;Bcl-2及Mcl-1表达水平上升,差异有统计学意义。流式细胞学分析:与对照组（3.59±0.345）相比,MPP+处理组（9.522±0.796,t=16.74,p＜0.01）凋亡细胞数增加,差异有统计学意义;与Tap63-NC+MPP+组（10.75±0.64）相比,Tap63过表达+MPP+处理组（5.903±0.566,t=13.90,p＜0.01）凋亡细胞数显著减少,差异有统计学意义。结论:对四组细胞进行Western-blot实验及流式细胞术实验后,我们发现,MPP+处理后的细胞模型中Tap63及抗凋亡因子的表达降低,促凋亡因子增加,Tap63过表达可使促凋亡因子Bax下调,抗凋亡蛋白Bcl-2及Mcl-1上调,抑制细胞凋亡,从而表明Tap63可能参与了帕金森病的发病机制,对帕金森细胞模型起到保护作用。
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