桔梗总皂苷对斑马鱼心律及胚胎发育的影响

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桔梗为多年生桔梗科植物桔梗Platycodongrandiflorum(Jacq.)A.DC.的干燥主根。桔梗含有多种化学成分:桔梗皂苷A,C,D2(platycodinA,C,D,D2),远志皂苷D,D2(polyga-lacinD,D2),以及植物甾醇葡萄糖苷等,其中主要活性成分为桔梗皂苷。药理和临床医学研究表明,桔梗具有祛痰、镇咳、抗炎、降血压、降血糖、减肥、抗肿瘤、提高人体免疫力等广泛的药理活性。广泛地应用于各种方剂、中成药制剂和化妆品中。 AhnKS等研究认为桔梗皂苷可以诱导细胞第二信使№的分泌以及调节TNF—α等作用。杨学忠等在《药物不良反应杂志》中报导桔梗导致心房纤维颤动。 我们以Danioreri0(肥strain)AB系斑马鱼为模式生物,研究桔梗对心律以及胚胎发育的影响,探讨桔梗对心血管不良反应的作用机制。 以山东产中药桔梗原生药材为材料(购自上海雷允上公司),利用水提取、大孔树脂吸附、乙醇溶液梯度洗脱方法提取桔梗总甙。经薄层层析色谱法鉴定后用于斑马鱼桔梗总甙暴露实验,观察该药对斑马鱼心律及胚胎发育的影响。通过RNA探针整体原位杂交、RT—PCR等方法研究不同浓度桔梗皂苷溶液处理斑马鱼胚胎以及心脏功能相关离子通道基因的表达变化;通过心电图观察药物处理前后斑马鱼心脏电生理变化;通过显微血管造影观察桔梗总甙对斑马鱼心血管发育的影响;同时利用siRNA基因沉默技术观察主要离子通道基因erg受干扰后对心脏生理功能的影响。 结果显示:低浓度(4μg/m1)桔梗总甙处理后斑马鱼心率减缓但未出现心房颤动,阳性对照即心肌离子通道特异性阻滞剂可以诱发斑马鱼心率迟缓和房室传导阻滞。心脏功能相关的离子通道基因kcnf表达水平明显降低;与体节、骨骼肌及血管相关的基因表达水平也明显降低。高浓度(8μg/mi)的桔梗总甙处理可以导致斑马鱼胚胎死亡率和畸形率显著增加。主要表现为头面部畸形,头和眼球变小;躯干部畸形,尾部上翘,体长变短;心血管异常,心腔扩大,心功能下降,心腔大量血细胞堆积等。医生在应用桔梗时应注意这些不良反应。
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