目的:1.建立IgA肾病大鼠模型,探讨固本通络方对IgA肾病大鼠24小时尿蛋白定量的影响。2.探索固本通络方通过对足细胞相关蛋白podocin、α-actinin-4表达的调节及血清B7-1的表达对蛋白尿治疗机制;3.探求肾玄府与足细胞裂隙隔膜相关性,证明肾玄府是足细胞裂隙隔膜的微观结构之一,为中医药多靶点治疗IgAN提供新的依据。方法:1.选取SPF级雄性SD大鼠80只,随机分为正常组、模型组、中药治疗组、氯沙坦钾治疗组,每组20只。除正常组,余组隔日灌服BSA 1ml/100g,灌胃持续6周,每周皮下注射CCL4 0.1ml+蓖麻油0.5ml,注射持续9周;分别于第6、8周按照0.05mg/只剂量经尾静脉注射LPS。2.模型建立结束后立即收集大鼠24h尿液总量。中药组予0.5ml/100g固本通络方灌胃,西药氯沙坦组按1ml/100g予氯沙坦钾灌胃,治疗持续4W。分别在治疗2W、4W末每组随机取10只大鼠收集尿液、血液、肾脏组织标本进行检测。运用生化法测定大鼠血清肌酐、尿素氮水平;运用光镜、电镜、免疫荧光检测肾脏组织病理;运用Real time-PCR法检测肾组织足细胞蛋白podocin、α-actinin-4 mRNA表达;运用ELISA法检测血清B7-1表达;运用免疫组化技术检测足细胞相关蛋白在肾脏组织的表达部位及阳性表达面积。结果:1.血肌酐和尿素氮结果:各组大鼠血清肌酐和尿素氮无显著差别(P>0.05)。2.24小时尿蛋白定量检测结果:治疗前,正常组24h尿蛋白定量明显低于模型组(P<0.05)。治疗2W、4W后,治疗组24h尿蛋白定量与模型组相比较有下降明显(P<0.05)。经治,中药组24h尿蛋白定量均低于氯沙坦钾组,具有统计学差异(P<0.05)。3.足细胞蛋白podocin mRNA、α-actinin-4 mRNA表达量:与模型组相比,中药组和氯沙坦组podocin mRNA表达量升高,α-actinin-4 mRNA含量明显降低(P<0.05);与治疗2W相比,治疗4W氯沙坦组podocin mRNA含量均明显升高;而治疗4W中药组较氯沙坦钾组α-actinin-4 mRNA含量降低明显(P<0.05)。4.肾组织病理检测结果:(1)HE染色示:模型组肾组织系膜细胞及基质中度增生,炎性细胞浸润,基底膜增厚,小血管硬化,管腔狭窄;中药组和氯沙坦组病变轻于模型组;正常组无明显改变。(2)免疫荧光染色示:模型组系膜区IgA荧光团强度极高;中药组和氯沙坦组较模型组强度明显减低;正常组极少见到IgA荧光团。(3)电镜结果示:模型组系膜细胞增生,基质增多,系膜区增宽,足突形态异常,部分足突融合,有可疑电子致密物沉积。中药组和氯沙坦组系膜细胞未见增生,系膜区无明显增宽,足突排列基本整齐,部分足突融合伴有间隙不均匀。5.肾组织免疫组化结果:(1)肾组织足细胞相关蛋白阳性率结果:治疗后,与模型组相比,中药组和氯沙坦组podocin阳性蛋白在肾组织表达均升高,α-actinin-4阳性蛋白在肾脏组织表达降低(P<0.01);治疗4W与治疗2W相比,治疗组均未有明显升高(P>0.05)。(2)免疫组化切片观察显示:较正常组相比,模型组肾小球周围有大量podocin、α-actinin-4蛋白呈棕黄色颗粒沉积,在肾小管和集合管周围分布较少;中药组和氯沙坦组较模型组棕黄色颗粒沉积明显减少。6.B7-1表达量:模型组较正常组B7-1明显升高(P<0.05),中药组和氯沙坦组较模型组B7-1表达明显减轻,具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.运用固本通络方能够降低IgAN大鼠蛋白尿,作用较氯沙坦钾更显著。2.固本通络方和氯沙坦钾片减少IgAN蛋白尿机制可能是通过调节足细胞podocin、α-actinin-4表达以减轻足细胞结构和功能损伤实现。3.固本通络方减少蛋白尿发生、发展机制可能是通过增加α-actinin-4表达,阻断B7-1激活,减轻足细胞结构的损伤,维持足细胞功能稳定实现。