【摘 要】
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目的观察经典Wnt/β-catenin以及骨形态发生蛋白(BMP)信号通路对大鼠骨髓来源的间充质干细胞体外增殖以及向成骨方向分化的影响。方法应用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离培
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目的观察经典Wnt/β-catenin以及骨形态发生蛋白(BMP)信号通路对大鼠骨髓来源的间充质干细胞体外增殖以及向成骨方向分化的影响。方法应用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞并分成四组:对照组,Wnt组,BMP组,Wnt3a和BMP-2联合组,在不同时间点用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖活性,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定、Von Kossa染色观察细胞向成骨分化情况和基质矿化程度。反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测成骨特异性标志物表达。结果培养第7d,CKK-8测吸光度值联合组为0.845,Wnt组为0.738,明显高于对照组0.409(P<0.05)。培养第6d和第12d,ALP活性吸光度值联合组为63.8和144.3,BMP-2组为40.8和104.1,均明显高于对照组7.3和18.9(P<0.05)。培养14d后,联合组骨钙素mRNA表达量高于对照组,而Runx2及Osterix表达量与其他组相比增高不显著。培养3w后,Von Kossa染色显示联合组钙结节数量及大小均高于对照组。结论Wnt3a因子和骨形态发生蛋白2联合诱导能有效地促进骨髓间充质干细胞增殖及向成骨方向分化,两者具有协同作用。
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