磁场对西方蜜蜂生存能力的影响及磁感应相关基因MagR和Cry的表达分析

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本研究旨在验证采集蜂磁场感应能力,探究磁场对蜜蜂定距离放飞归巢、自然出巢归巢、寿命及学习记忆的影响,克隆西方蜜蜂Apis mellifera磁受体基因AmMagR的序列,并分析磁场对该基因和Cry基因(隐花色素基因)在工蜂中表达特征的影响,以期为揭示磁场对蜜蜂的影响和蜜蜂利用地磁导航的机理提供理论依据。本研究通过磁感装置分析采集蜂对有无磁场、糖水浓度、采集位置的选择率。采用RFID(无线射频)技术来监测蜜蜂的出巢归巢活动,通过PER试验来探究磁场对采集蜂学习记忆的影响。以西方蜜蜂工蜂为材料,提取其总RNA,通过RT-PCR技术克隆西方蜜蜂MagR基因的序列。采用实时荧光定量PCR技术(qPCR)分析在西方蜜蜂工蜂不同日龄(1日龄、5日龄和21日龄)和不同组织(头部、胸部和腹部)中MagR、Cry基因的相对表达量,分析不同磁场强度(0Gs、1Gs、1OGs、20Gs、50Gs)下5日龄工蜂胸部MagR、Cry基因的相对表达量。研究结果如下:1.磁场感应结果表明,蜜蜂对有磁场一侧的选择率显著高于无磁场一侧,对训练期间放置过50%糖水一侧的选择率显著高于放置过20%糖水一侧,但在方向选择中,对L1、L2两侧的选择率无显著差异。2.RFID监测结果显示,采集蜂在1Gs、10Gs和20Gs磁场条件下的归巢率与对照组比较无显著差异,在50Gs的磁场环境下归巢率显著降低;采集蜂在无磁场的条件下归巢率最高,归巢时间最短。蜜蜂整个生命周期都处于50Gs磁场环境时,首次出巢率、平均出巢次数、生存率和平均寿命与对照组均无显著差异。PER结果表明,当磁场强度为1Gs,10Gs和20Gs时工蜂的学习记忆能力显著降低,在50Gs时与对照组无显著差异。3.克隆到西方蜜蜂MagR基因,并命名为AmMagR(GenBank登录号:MH635411),其序列长度为 748 bp,编码区长 390 bp,编码130个氨基酸,其蛋白质分子量为14.142 kDa,理论等电点为9.06,无信号肽,无跨膜结构,且在第24-126位氨基酸之间得到一个结构域Fe-S_biosyn。系统发育树显示,西方蜜蜂AmMagR与小蜜蜂Apis florae AfIscA(IscA 别称 MagR)、中华蜜蜂 cerana cerana AcIscA基因聚成一支。荧光定量PCR结果表明,AmMagR和Cry基因均在5日龄工蜂的相对表达量最高,1日龄、5日龄和21日龄工蜂胸部的AmMagR和Cry基因表达量也均显著高于头部和腹部。磁场处理后显示无磁场环境和1Gs处理条件下工蜂胸部AmMagR和Cry基因相对表达量均高于10Gs、20Gs、50Gs处理组。
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