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背景多发性硬化症(Multiple Sclerosis,MS)是一种中枢神经系统自体免疫性疾病,即机体自身的免疫系统对环绕在神经轴突上的髓鞘发动进攻,导致髓鞘脱落并形成病灶。实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)的病理特征与MS非常相似,因此成为研究和治疗MS的重要动物模型。经血源性子宫内膜干细胞(Menstrual blood-derived mesenchymal stem cells,MenSC)由于其获取的无侵略性、短周期和可重复性,其优势对比其他来源的间充质干细胞,如骨髓、脐带、脂肪、胎盘和胚胎干细胞等更为明显,且未检索到利用MenSC来治疗EAE的文献报道。另一方面,虽然有一些用其他类型干细胞治疗EAE的文献报道,但其作用机制仍不十分清楚,因此本课题旨在探究MenSC对EAE的治疗效果及可能的分子及细胞机制。目的1.建立MenSC的分离培养体系。2.建立小鼠EAE模型。3.探究MenSC移植治疗小鼠EAE的效果。4.探究MenSC治疗小鼠EAE的作用机制。方法1.从新鲜的经血样本中提取、培养和鉴定间充质干细胞,为后续实验提供高质量和足够数量的经血源性子宫内膜干细胞。2.构建小鼠EAE模型,通过皮下注射含MOG35-55和有热灭活的结核分枝杆菌的完全弗氏佐剂(CFA)的乳化液,并于当天和第二天分别尾静脉注射相同剂量的百日咳毒素(PTX)来构建小鼠EAE模型。3.细胞移植采用尾静脉注射和腹腔注射;动物解剖,从脾脏、淋巴结等各个器官中提取免疫细胞,进行细胞表面和胞内染色,用流式细胞术对其进行分类和鉴定。结果1.用本实验建立的培养体系,从经血样本中成功提取出间充质干细胞,经流式细胞术鉴定后表明其符合国际间充质干细胞的认证标准。2.分别在EAE诱导前一天(day-1)、第6天(day6)、第10天(day10)和第19天(day19)注射同等剂量(1×106个/只)的MenSC,结果表明:在day-1、day6和day10这三个时间点注射干细胞均能不用程度地抑制EAE疾病的进展,day6尤为明显,但在day19注射干细胞并不能改善EAE的临床评分。3.尾静脉注射和腹腔注射同等剂量的MenSC,从EAE临床评分结果来看,两种注射方式均能显著改善EAE的临床症状,但相比腹腔注射,尾静脉注射的抑制效果更好。4.对比未注射MenSC的EAE小鼠,经MenSC治疗过的小鼠,其外周免疫器官和中枢神经系统(CNS)中的CD4+T细胞、Th1和Th17细胞所占比例明显降低,且外周神经系统中的MOG特异性T细胞Th1和Th17的比例也明显降低。结论1.对小鼠EAE模型进行细胞移植治疗时,细胞移植时间点的选择对EAE的临床评分有直接的影响,day-1、day6和day10注射MenSC均能改善EAE的临床症状,且day6注射的治疗效果最好,但在day19注射MenSC不能降低EAE的临床评分。2.MenSC进入EAE小鼠体内可能是通过抑制外周免疫器官和CNS中CD4+T细胞、MOG特异性T细胞、Th1和Th17细胞来发挥作用的。