研究背景:自从著名肝病学家Rogking提出肝纤维化（Liver Fibrosis,LF）在致病因素消除后可以发生逆转的观点后,肝纤维化发病机制的研究就成了肝病攻关的热点课题之一。肝纤维化的发生机制是一个复杂的病理过程,涉及许多不同水平的调节,其病理特征是细胞外基质（extracellular matrix,ECM）在窦周间隙的大量沉积,其产生受多种因素的影响,这些因素在肝纤维化的形成及发展中具有重要作用,并影响其转归。目前研究发现:肝星状细胞（Liver sinusoidal capillarization,HSC）约占肝脏非实质细胞总数的5%～10%,激活的HSC是肝纤维化时产生各种ECM成分的主要细胞群,HSC在这一病理进程中担当关键角色。参与肝纤维化形成的因素还包括肝枯否氏细胞（Liver Kupffer cell,KC）、肝窦内皮细胞（Liver sinusoidalendothelial cell,SEC）、胶原蛋白、蛋白多糖、糖蛋白及多种细胞因子等。其中,常见的细胞因子有转化生长因子β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）、血小板衍生生长因子（Platelet-derived growth factor,PDGF）、肿瘤坏死因子-α（Tumornecrosis facto-α,TNF-α）、γ-干扰素（γ-interferon,IFN-γ）、白细胞介素-1（Interleukin-1,IL-1）等。胶原蛋白主要有5种,其中以Ⅰ、Ⅲ型为主:Ⅳ型在LF中的作用是参与肝血窦的毛细血管化,肝窦毛细血管化（Liver sinusoidalcapillarization,LSC）是LF发展至肝硬化的基础之一。但Ⅳ型胶原（CollagenⅣ,Co-Ⅳ）、血管内皮细胞生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、环氧合酶-2（yclooxygen-2,COX-2）、转换生长因子β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）、碱性成纤维细胞生长因子（Basic fibroblast growth factor,b-FGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）在LF中的作用,尚缺乏随访的肝组织学资料,文献报道较少。因此,本研究以此为切入点,观察慢性乙型肝炎（chronichepatitis B,CHB）不同肝病变及肝脏病理转归与Co-Ⅳ,VEGF,COX-2,TGF-β1,b-FGF,a-SMA表达的关系,以利于探讨采取针对性的治疗措施,使肝病变向好的方向转化。研究目的:①分别研究Co-Ⅳ,VEGF,COX-2,TGF-β1,b-FGF,a-SMA在200例慢性乙型病毒性肝炎患者肝脏中的表达与肝脏病理分级分期的关系;②以135例慢性乙型病毒性肝炎患者的首、末2次肝穿后肝活检样本为研究对象,探索Co-Ⅳ,VEGF,COX-2,TGF-β1,b-FGF,a-SMA在肝组织中的表达与其病理转归的关系。研究方法:1.1慢性乙型病毒性肝炎病理分级分期及其相关因子表达的免疫组化研究①随机选取我院2004—2008年慢性乙型病毒性肝炎患者的肝活检标本200例,用日本生产16号肝活检针,1秒钟负压抽吸法,在肝脏2个不同部位各获取长度≥1.5cm的肝标本1条,10%福尔马林液固定,常规石蜡连续切片,作HE、网状、胶原及弹力纤维染色（由专人严格按试剂盒说明书操作）。以病变较重的1条肝组织为准,参照国内诊断标准将其分为慢性肝炎（G₁,G₂,G₃,G₄）、并对其肝纤维化进行了分期观察（S₁,S₂,S₃,S₄）。对本组肝组织病理学G,S转变作总结。G,S分值下降为好转,上升为加重,否则为无变化。②肝样本作Co-Ⅳ,VEGF,COX-2,TGF-β1,b-FGF,a-SMA免疫组化染色。另选10例正常肝组织作对照（对照组）。光镜观察肝组织病理学转变及Co-Ⅳ,VEGF,COX-2,TGF-β1,b-FGF,a-SMA染色程度、分布情况。观察其表达程度与慢性乙肝病理分级、分期的关系。采用t,χ²显著性检验,P＜0.05认为有显著性差异。1.2.慢性乙型病毒性肝炎组织学随访研究①选取我院1983—2008年共接收慢性乙型病毒性肝炎2次以上随访的肝活检样本135例。②我们对这135例首、末两次肝活检样本组织分别作了组织化学及Co-Ⅳ,VEGF,COX-2,TGF-β1,b-FGF,a-SMA免疫组化染色。观察首、末两次肝组织病理分级、分期的变化与Co-Ⅳ,VEGF,COX-2,TGF-β1,b-FGF,a-SMA表达变化的关系。结果:1.1慢性乙型病毒性肝炎病理分级分期及其相关因子表达的免疫组化研究①在本组200例慢性乙型病毒性肝炎中,LSC占80%以上,有轻、中、重度表现。网状、胶原及弹力纤维组化染色显示,其增生程度、分布范围与LSC的轻重程度呈同步关系。②Co-Ⅳ免疫组化染色显示,Co-Ⅳ表达主要分布于肝窦壁、血管间隔、纤维带及纤维瘢痕中。在CHB较轻组（G₁,G₂）,Co-Ⅳ为灶性阳性表达,主要见于局灶性扩张的肝窦壁,强阳性表达占少数（24.7%）。在CHB较重组（G₃,G₄）及肝硬化（Livercirrhosis,LC）,Co-Ⅳ强阳性弥漫性表达于扩张肝窦壁,强阳性表达占大多数。③VEGF免疫组化染色显示,在对照组,VEGF仅在个别的肝细胞示微弱阳性反应（本文按阴性）,其他组织阴性。VEGF有三种表达形态,即胞质型、膜窦型和窦内皮细胞型,尤其在重度LSC组其表达更为强烈。④COX-2免疫组化染色显示,正常组示阴性。在LSCⅠ组,COX-2以胞核表达为主,而在LSCⅡ及LSCⅢ组,则以胞浆表达占优势。⑤TGF-β1免疫组化染色显示,在CHB较轻组（G₁,G₂）,TGF-β1在炎症坏死区肝细胞呈散在灶性阳性表达,肝窦壁及血管壁中呈断续阳性表达,且多数（94%）示阳性表达,少数示强阳性。在中、重型组（G₃,G₄）,TGF-β1在血管间桥及坏死区、肝窦毛细血管壁及部分窦内皮细胞中有表达,且随着肝病变的加重,TGF-β1的表达强度及范围均增强增大。⑥b-FGF免疫组化染色显示,在CHB较轻组（G₁,G₂）,b-FGF表达以阳性占多数（66%）,强阳性占少数。而在CHB较重组（G₃,G₄）,b-FGF的表达随肝细胞变性坏死及肝纤维化程度加重而强阳性表率逐渐上升。⑦α-SMA免疫组化染色显示,在CHB较轻组（G₁,G₂）,α-SMA阳性细胞明显地分布于门管、静脉周围区域及其相连接的SEC,DS的HSC及成肌纤维细胞,强阳性占少数。而在CHB较重组（G₃,G₄）,在碎屑坏死及相邻的肝小叶部位,以及门管炎症增生的毛细血管区域内皮细胞及桥形纤维间隔,α-SMA示强阳性表达,阳性表达仅占14%。1.2慢性乙型病毒性肝炎组织学随访研究在G₁组,首、末2次肝组织Co-Ⅳ,VEGE COX-2,TGF-β1,b-FGF,a-SMA表达无差异性,其表达变化集中在G₂～G₄组,尤其后者为显著（P＜0.001）。而在S₁,S₂组,其表达则显示差异性（P＜0.05～0.01）,尤其S₃组最显著（P＜0.001）,而S₄组则无差异性（P＞0.05）。结论:1.1 200例慢性乙型病毒性肝炎病理分级分期及其相关因子表达的免疫组化研究表明,肝组织COX-2,VEGF表达增强可促进LSC及肝纤维化。肝组织Co-Ⅳ,VEGF,COX-2,TGF-β1,b-FGF,a-SMA表达与慢性乙肝患者肝脏病理分期分级关系密切。1.2 135例随访研究显示,Co-Ⅳ,VEGF,COX-2,TGF-β1,b-FGE a-SMA表达程度与首末2次肝组织病理分级分期高低呈同步关系,在肝脏的病理转归中起重要作用。