穿龙薯蓣快繁体系的建立及药用成分含量的研究

来源 :延边大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dengjuanjuan8288
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穿龙薯蓣(Dioscorea ipponica Makino)为薯蓣科薯蓣属的多年生缠绕藤本,具有很高的药用价值。由于近些年来野生资源遭到破坏,传统繁殖方法由于种根资源有限、种子休眠、播种发芽率低等原因,导致其在人工繁殖和栽培时出现困难。因此在本试验中,以穿龙薯蓣的茎段为试验试材,通过诱导其再分化产生大量的腋芽,对腋芽进行增殖培养,再诱导根的产生,探究其驯化条件,从而建立完整、高效的穿龙薯蓣的组培快繁体系,并对组培苗根中含有的几种药用成分进行测定,为穿龙薯蓣进一步的研究利用提供理论依据。1、采用不同的个植体和不同的消毒方式对成活率有显著影响。选择茎段作为外植体,用75%酒精消毒30 s,再用0.2%HgCl2消毒2 min时成活率最高达到82.7%。2、不同种类的培养基配方不同,对植物的生长的产生不同的影响,在本试验中,不同种类的对腋芽的诱导效果差异显著。采用MS基本培养基,添加6-BA2.5 mg·L-1、2,4-D0.5 mg·L-1时的诱导率最高,达90.8%,株高3.8cm,植株鲜重1.5g,干重160.9mg。3、在对穿龙薯蓣增殖过程中的各因素进行筛选时,发现不同的细胞分裂素的种类及浓度对穿龙薯蓣的增殖培养影响明显,添加6-BA3.0 mg·L-1植株的的鲜重和干重达到最高,分别为1.5 g、133.5 mg,增殖系数达到7.8,株高3.4 cm,优于同类细胞分裂素的其他浓度处理;生长素种类为NAA,浓度为0.75 mg·L-1时植株的生长达到了最佳状态,株高2.7 cm、鲜重1.5 g干重为133.6 mg,增殖效果较同种类其他浓度处理好,增殖系数高达8.1;对糖源进行探究时发现,添加40 g·L-1的蔗糖时最有利于植物的增殖生长;对光照强度进行探究时发现,光照强度为2400lx是增殖适宜的光照强度,过高或过低都会对植株的增殖生长起到抑制作用。结果表明,采用培养基MS+6-BA3.0 mg·L-1+NAA0.75 mg·L-1+蔗糖40 g·L-1+琼脂5 g·L-1,光照24001x时植株的增殖效果最好,增殖系数高达8.4,株高5.1cm,鲜重1.3 g,干重 143.2mg。4、穿龙薯蓣生根培养选择1/2MS培养基时生根率达90.0%,鲜重318.6 mg,干重27.4 mg,须根数为14.0条,根状茎个数2.5个,高于其他浓度的MS培养基;添加IBA和NAA进行生根培养时,NAA生根效果由于IBA,添加NAA1.5 mg·L-1时,鲜重为359.4 mg干重为3 1.2mg,须根数为16.1条,根状茎3.6个高于其他处理;在培养基中添加活性炭有利于植株的生根,随着活性炭含量提高,根状茎、须根数量先增加后减少,当活性炭为0.4g·L-1时,植株鲜重为380.1 mg,干重31.7 mg,根状茎为4.3个,生根率为98.3%,达到最大;添加蔗糖时有利于植株生根,随着浓度增加,植株的鲜重、干重、须根数、根状茎数先增加后减小,当蔗糖为50g·L-1时,植株的鲜重、干重、须根数、根状茎数分别达到最大为417.4 mg、35.7 mg、23.3条、5.0 个。5、MS培养基的不同浓度、不同生长素及其浓度和蔗糖浓度对穿龙薯蓣组培苗根中药用成分包括薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、总黄酮、多糖等积累的有一定的影响。采用MS培养基时薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、总黄酮、多糖含量分别为749.0μg·g-1、200.0μg·、1200.0μg·g-1、26.6 mg·g-1;选择NAA2.0 mg·I-1时薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、总黄酮、多糖含量分别为882.4 μg·g-1、1241.2μg·g-1、73 mg·g-1、24.4mg·g-1;当蔗糖50 g·L-1对穿龙薯蓣组培苗根中的药用成分的积累较为有利,各物质成分的含量分别为751.3 μg·g-1,1340.3 μg·g-1.8mg·g-1,26.9 mg·g-1。6、组培苗驯化试验中,植株在草炭和珍珠岩体积1:1混合基质成活率最高,为81.3%,选择同时具备须根和根状茎的植株跟有利于组培苗的成活,成活率最高为902%。
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