桧烯是重要的单萜类物质,在药品、香水和喷气燃料等领域有重要应用。解脂酵母（Yarrowia lipolytica）作为一种常见的模式底盘细胞,因胞内的脂质体可以存储脂质产物,且底物谱宽泛。所以,本研究在解脂酵母中构建脂质产物桧烯的合成路径,通过关键酶筛选、前体甲羟戊酸（MVA）合成路径强化、非路径相关基因调控以及培养基优化等策略,实现桧烯的高效合成,拓展了解脂酵母产物合成的应用范畴。本研究首先对未截短和截短的桧烯合酶Sp＿（t）Sab S以及ERG20^WW（法尼基焦磷酸合酶F96W/N127W的突变体）和NDPS（二甲基烯丙基转移酶）进行组合筛选,首次在解脂酵母中实现桧烯的从头合成。共表达截短的桧烯合酶Sp＿t Sab S和ERG20^WW可取得最高的桧烯产量,达到1.77 mg/L,且表明相对于NPP（橙花基焦磷酸）,GPP（香叶基二磷酸）是Sp＿t Sab S的优选底物。在此基础上,分别过表达MVA路径上关键基因ERG12（甲羟戊酸激酶）和HMGR（甲羟戊酰辅酶A还原酶）。仅过表达HMGR可提高桧烯产量2.53倍,达到5.19 mg/L。通过6个非路径相关基因、17个与脂代谢相关和5个与烃氧化相关基因的过表达,进一步考察非路径相关靶点对桧烯合成的影响。发现分别过表达YALI0F30987g（CTA1,过氧化氢酶）,YALI0E00814g（AOX,替代氧化酶）和YALI0A19910g（抑制苯乙醇合成）,均可显著提升桧烯产量。其中过表达YALI0F30987g（CTA1,过氧化氢酶）使桧烯产量达到15.90 mg/L。最终通过发酵条件优化,研究碳源、氮源、接种浓度和发酵时间对桧烯产量的影响,使桧烯产量达到26.90 mg/L,是已报道解脂酵母中桧烯的最高产量。