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目的 糖尿病肾病是导致终末期肾脏疾病的主要原因,病理机制十分复杂,其中,RAS的激活被认为在糖尿病肾病的病理演变过程中扮演重要角色。本课题组研发的针对AT1R胞外第二环的治疗性疫苗ATRQβ-001,除能有效降低动物血压外,还展现出良好的靶器官保护作用。前期已经证实ATRQβ-001疫苗可有效减轻糖尿病动物肾脏病变。CQ8抗体是由AT1RQβ-001疫苗衍生出的特异性单克隆抗体,本实验的目的在于验证ATRQβ-001疫苗对糖尿病肾病的保护作用主要是通过其CQ8单克隆抗体实现的,并进一步探讨CQ8抗体对糖尿病肾病的作用及可能的机制。方法 动物实验选取2型糖尿病小鼠db/db小鼠及其正常对照db/m小鼠为实验对象,8周龄时检测db/db小鼠血糖达到糖尿病标准后,将其随机分为3组,实验共设置4组如下:(1)db/db control组(2)db/db 20ug CQ8抗体组:8周龄始每周给予尾静脉注射20ug CQ8抗体一次(3)db/db 100ug CQ8抗体组:8周龄始每周给予尾静脉注射100ug CQ8抗体一次(4)db/m组:同周龄的db/m小鼠作为正常对照组。实验周期共20周,期间所有小鼠监测体重、血糖及血压,17周龄及27周龄时代谢笼收集24h尿液分析。28周龄时将小鼠处死,取血清测血肌酐、血尿素氮,肾脏标本做病理检查,q RT-PCR方法检测肾脏皮质脂肪酸氧化和自噬相关指标(CPT1、CPT2、Acox1、pparα,beclin-1、LC3、Atg5)的表达情况。在体外,HK-2细胞(人近端肾小管上皮细胞)给予30m M D-glucose刺激,共设5个组:(1)normal glucose组:正常对照组;(2)mannitol组:30m M mannitol作为等渗对照;(3)High glucose组:30m M D-glucose刺激;(4)High glucose+CQ8抗体组:5*10-3mg/ml CQ8抗体预孵育1h,再给予30m M D-glucose刺激;(5)High glucose+losartan组:5*10-6 mol/l losartan预孵育1h,30m M D-glucose刺激。CCK-8实验测定细胞活性,油红O染色观察细胞内脂质形成情况,q RT-PCR方法检测细胞脂肪酸氧化及自噬相关指标的表达水平。结果 CQ8抗体可有效降低db/db小鼠体重及血压,降低尿蛋白水平,一定程度上改善肾功能,并能减轻糖尿病小鼠肾脏病理改变,改善肾脏的脂肪酸氧化及自噬功能。在体外,HK-2细胞经高糖刺激后,细胞活性随刺激时间延长逐渐降低,而CQ8抗体可有效提升细胞活性,并可明显改善高糖诱导的脂肪酸氧化和自噬功能缺陷,减少细胞内脂质形成。结论 CQ8抗体可有效减轻db/db小鼠糖尿病肾脏病变,这可能与其能改善肾小管上皮细胞受损的脂肪酸氧化和自噬功能有关。