压疮深部组织损伤（Deep Tissue Injury，DTI）是压疮中最严重分期，好发于受压骨隆突处，是临床护理工作的重点和难点。DTI可有皮肤深部组织肌层损伤，局部持续受压时，由于血流灌注受阻、大量自由基产生造成肌细胞损伤。其早期难以发现，发生潜匿，极易发展为难愈性创面。目前压疮机制研究主要集中于动物实验，尚未有针对DTI机制的体外干预性研究。碱性成纤维生长因子（bFGF）对多种细胞损伤效果确切，是一种多能细胞生长因子。因此建立体外DTI模型，在细胞水平对bFGF调控骨骼肌细胞氧化应激机制及其相关蛋白表达进行探讨，或许能够深入理解压疮深部组织损伤，为其防治提供新策略。　　第一部分：大鼠体外压疮深部组织损伤肌细胞氧化应激模型构建　　目的：　　构建体外压疮深部组织肌细胞的氧化应激模型，为在细胞水平进一步探讨压疮深部组织的损伤机制奠定基础。　　方法：　　选取培养至对数生长期的大鼠成肌细胞，随机分为6组即对照组及5个实验组。对照组行常规细胞培养，实验组分别采用过氧化氢浓度50、100、150、200、250μmol/L处理1-4 h后检测四氮甲基唑蓝（MTT），重点观察不同氧化应激水平作用4h后乳酸脱氧酶（LDH）、肌细胞Hoechst染色及形态学方面的改变。　　结果：　　1.对照组1h至4 h细胞存活率为100％，活性无明显变化。　　2.实验组过氧化氢在100μmol/L以下时，促进大鼠成肌细胞增殖，当浓度高于100μmol/L时，2 h后呈损伤趋势，4 h时存活率为20%-75%不等。　　3.随氧化应激程度加重，大鼠成肌细胞形态逐渐缩收，细胞间隙逐渐增加。　　4.100μmol/L过氧化氢作用4 h后，Hoechst细胞荧光染色显示部分大鼠肌细胞趋向凋亡。　　5.大鼠成肌细胞在100μmol/L过氧化氢作用4h后LDH释放率相比对照组具有显著性差异。　　结论：　　1.随氧化应激程度加重，大鼠成肌细胞活力下降，细胞膜通透性增加，胞核渐进性凋亡。　　2.大鼠成肌细胞经过氧化氢100μmo l/L作用4 h，可作为压疮深部组织细胞氧化应激的体外模型。　　第二部分：bFGF干预在大鼠体外压疮深部组织的肌细胞损伤中的作用　　目的：　　在大鼠体外DTI氧化应激模型基础上，探讨bFGF干预在大鼠成肌细胞氧化应激损伤中的作用。　　方法：　　进行常规细胞培养，待细胞生长至指数增长期后，同时换液。根据培养基中有无H2O2及bFGF干预可分为：正常对照组（Con），单纯bFGF组（bFGF），氧化应激组(H2O2)及干预组(bFGF+H2O2)。氧化应激组过氧化氢浓度及时间点的确定参照R．Dhanya及前期体外DTI细胞氧化应激模型构建过程[43，51]的研究方法，干预组(bFGF+H2O2，bFGF浓度参考Wang等[52,53]的研究)，正常对照组不做任何处理。单纯bFGF组：提前2 h给予100 ng/ml bFGF。氧化应激组：100μmol/L双氧水培养基处理4 h。干预组：100 ng/ml bFGF预给2 h后，按照100μmol/L加入双氧水继续孵育4h。各组分别于实验终点进行多水平检测。免疫荧光法分析肌细胞的活性氧自由基、Bax及Cyt C表达情况；SABC免疫组化法于倒置显微镜下观察Bcl-2与Bax表达变化；蛋白印迹检测肌细胞PARP,PCNA等蛋白表达趋势。　　结果：　　1.氧自由基表达水平：活性氧自由基检测结果显示氧化应激组中大鼠成肌细胞ROS荧光表达呈强阳性，细胞突触变短，胞质明显回缩。干预组相较于氧化应激组，其氧化应激强度显著下降(P＜0.01)。　　2.免疫组化结果显示：正常对照组和单纯bFGF组大鼠成肌细胞的细胞质中含有大量Bcl-2颗粒，少数细胞Bax颗粒少量表达；应激组Bcl-2阳性颗粒明显减少，Bax表达显著增加；造模前2h给予bFGF干预，可上调Bcl-2水平，抑制Bax表达。　　3.间接免疫荧光结果显示：正常对照组和单纯bFGF组的Bax及Cyt C蛋白荧光较弱。氧化应激组Bax荧光表达呈强阳性，Cyt C渗入胞外，呈弥漫性红色荧光颗粒。而含有bFGF的干预组Bax荧光强度明显减弱，Cyt C仍局限于胞质，荧光颗粒亮度减弱。　　4.Western blot检测显示：正常对照组和单纯bFGF组低水平表达Bax蛋白、Cyt.C及PARP蛋白，PCNA较高水平表达；氧化应激组Bax、Cyt.C及PARP蛋白表量明显增加，细胞增殖分裂进程受阻；干预组大鼠成肌细胞Bax蛋白、细胞Cyt.C及PARP水平显著下调，同时Bcl-2、PCNA表达量增加。　　结论：　　1.外源性bFGF可通过对氧化应激总水平的下调，改善大鼠成肌细胞损伤。　　2.bFGF能够下调氧化应激相关蛋白Bax、Cyt.C及PARP水平，上调Bcl-2、PCNA表达相关，达到减少细胞损伤及凋亡的目的。