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本试验探究开产前期(90 d),产蛋期(120 d),产蛋末期(500 d)的雷州黑鸭卵巢和卵泡发育情况,并对高产和低产群雷州黑鸭卵巢组织进行了DNA甲基化分析,以了解DNA甲基化与雷州黑鸭产蛋性状的关系。主要采用HE染色方法对开产前期、产蛋期和产蛋末期这三个时期雷州黑鸭的卵巢和卵泡进行形态学分析;采用MSAP技术对雷州黑鸭卵巢组织基因组进行DNA甲基化程度检测,对甲基化多态位点进行克隆和测序,并与雷州黑鸭产蛋性状进行关联分析;采用RT-PCR技术研究基因在高产和低产卵巢组织中的表达量,研究结果表明:1.本试验通过对开产前期、产蛋期和产蛋末期的雷州黑鸭的卵巢卵泡进行形态学和组织学观察,发现在不同发育时期,雷州黑鸭的卵巢的体积和重量有着明显的差异,开产前期卵巢的重量和体积远远低于产蛋期和产蛋末期卵巢的重量和体积。雷州黑鸭各级卵泡的直径大小分别为SWF:<4mm、LWF:(4.49±0.43)mm、SYF:(5.81±0.37)mm、LYF:(6.94±0.29)mm、F6:(10.63±0.88)mm、F5:(14.11±0.61)mm、F4:(17.33±1.13)mm、F3:(24.31±1.24)mm、F2:(30.70±1.42)mm、F1:(34.34±0.44)mm。雷州黑鸭的卵巢结构可分生殖上皮、白膜、卵巢皮质和卵巢髓质。在卵泡的发育过程中,颗粒层和膜层的厚度也会随之变化。2.通过甲基化敏感多态性扩增技术(MSAP),检测高产和低产雷州黑鸭卵巢组织基因组DNA甲基化修饰水平,结果显示有三种甲基化模式,全甲基化,半甲基化和非甲基化模式;高产组总甲基化水平(49.74±16.94)%,全甲基化水平(42.68±17.92)%,半甲基化水平(7.07±3.78)%,非甲基化水平(50.27±16.94)%;低产组总甲基化水平(45.47±8.58)%,全甲基化水平(38.29±13.17)%,半甲基化水平(7.18±4.67)%,非甲基化水平(54.53±8.58)%。结果表明,高产组和低产组雷州黑鸭DNA甲基化水平差异不显著(P>0.05)。3.通过克隆,测序,最终筛选出6条理想的DNA甲基化特异片段序列,经在线Blast比对,发现有1条片段位于非编码区,与比对上的序列具有100%的同源序列基因注释为LOC113844334;1条片段位于基因编码区,与鸭子基因组具有99%的同源序列,基因注释为LRRTM3(leucine rich repeat transmembrane neuronal 3),其余四条均没有相似序列。4.对特异片段回收获得的基因LRRTM3进行定量分析,LRRTM3基因在高产和低产卵巢中均有表达,且低产组显著高于高产组,其与甲基化修饰呈负相关(P<0.05),推测LRRTM3基因序列的甲基化修饰抑制了该基因在卵巢中的表达。BSP甲基化测序结果表明,高产组LRRTM3基因甲基化程度高于低产组,但是差异不大,推测LRRTM3基因表达调控机制不仅仅受表观遗传调控,很有可能受到群体遗传等分子机制的调控,具体的表达调控途径及机制还有待后续进一步研究。