【摘 要】
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布鲁氏菌属于兼性胞内寄生菌,可感染人和动物,引起患病——布鲁氏菌病。布鲁氏菌病在全球范围内流行,每年有50多万新增病例,患病个体如果不及时医治将会转为慢性疾病,给经济
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布鲁氏菌属于兼性胞内寄生菌,可感染人和动物,引起患病——布鲁氏菌病。布鲁氏菌病在全球范围内流行,每年有50多万新增病例,患病个体如果不及时医治将会转为慢性疾病,给经济和健康带来巨大损失。布鲁氏菌致病的关键因素在于其胞内寄生能力。受感染的机体出现临床症状需要一定量的病原体,布鲁氏菌具有隐匿特性,在大量繁殖并扩散至全身时机体出现临床表征,如流产、发热、关节痛等。布鲁氏菌的复制需要必需元素铁,dhbC基因是合成铁转运体2,3-二羟基苯甲酸所需的基因之一,有研究将流产布鲁氏菌dhbC基因缺失株感染妊娠母牛,其毒力较亲本株明显减弱。但关于dhbC基因缺失株布鲁氏菌感染后宿主基因表达发生的变化还没有研究报道。本实验采用酶切连接法和PCR法构建同源重组质粒pGEM-7Zf（+）-ΔdhbC,使用电转化方式将其转入羊种布鲁氏菌M5-90菌株感受态细胞中,用卡那霉素抗性平板筛选,并连续传代20次使突变株稳定遗传,最后构建M5-90-ΔdhbC菌株。将M5-90-ΔdhbC菌株与M5-90株分别感染绵羊睾丸间质细胞,共孵育4h后提取细胞总RNA。采用Illumina NovaseqTM 6000对mRNA进行测序,经数据处理和分析,产生255个mRNA差异表达基因;采用Illumina Hiseq2000/2500对miRNA进行测序,经数据处理和分析,产生90个miRNA差异表达基因。将差异表达的mRNA和miRNA进行联合分析,有17个mRNAs差异表达基因与36个miRNAs差异表达基因存在74对对应关系,其中表达上调的IDO1基因与8个表达均为下调的miRNAs chi-miR-19a、PC-3p-10201426、PC-3p-1411935、PC-3p-16050394、PC-3p-18023337、PC-3p-5214177、PC-3p-5943163、PC-3p-71424 48存在靶向关系,通过 GO 分析,该基因富集免疫、炎症反应;表达下调的SLC2A5基因与表达下调的miRNA PC-3p-38194120存在对应关系,经KEGG分析,该基因显著富集到碳水化合物的消化吸收途径;另外两个表达上调的差异基因CCL5和CXCL10显著富集趋化因子信号通路。
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