水飞蓟宾抗肿瘤及对神经元细胞保护作用机制的研究

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水飞蓟宾是从菊科植物水飞蓟的果实及种子中提取的多酚黄酮类化合物,具有抗炎、抗肿瘤和抗氧化等作用。本文对水飞蓟宾的体外抗肿瘤活性及保护神经元细胞两方面进行了研究:主要从氧化应激角度阐述了水飞蓟宾诱导人恶性胶质瘤U251细胞凋亡的机制;以及对H2O2处理的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用。实验结果表明,水飞蓟宾对U251细胞增殖具有明显的抑制作用。核染色分析验证了水飞蓟宾诱导U251细胞死亡为细胞凋亡。流式细胞仪检测结果表明,水飞蓟宾作用U251细胞24 h、48 h和72 h均诱导了U251细胞凋亡,且呈时间和浓度依赖关系;同时,水飞蓟宾作用24 h后细胞内ROS水平升高,线粒体膜电位下降,并且水飞蓟宾可以造成U251细胞G2/M期和S期阻滞。Western blot结果表明,水飞蓟宾处理后上调了U251细胞内Cleaved-Caspase-3和Cleaved-Caspase-9表达,而Caspase-8没有被活化。当加入抗氧化剂NAC后,抑制了水飞蓟宾对U251细胞的凋亡作用。在对神经母细胞瘤的作用研究中,水飞蓟宾作用24 h对SH-SY5Y细胞活力影响较小,而200μM H2O2处理细胞24 h后,细胞活力接近50%,此浓度作为氧化损伤最适浓度,与模型组相比较,用50μM和100μΜ水飞蓟宾预处理SH-SY5Y细胞3 h能显著提高细胞存活率(P<0.01)和减少凋亡,降低细胞内活性氧(ROS)的水平,稳定线粒体膜电位,降低了和凋亡相关Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3的表达。由此可见,水飞蓟宾对不同的细胞株有不同的作用,水飞蓟宾长时间处理U251细胞可以诱导凋亡和抑制增殖,而水飞蓟宾短时间处理却可以保护H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤。水飞蓟宾诱导U251细胞凋亡可能通过造成细胞G2/M期和S期阻滞,提高细胞内ROS水平,进而通过线粒体途径来诱导人恶性胶质瘤U251细胞凋亡。而水飞蓟宾保护SH-SY5Y细胞免受H2O2损伤可能通过水飞蓟宾的抗氧化性和稳定线粒体膜电位,从而抑制细胞的凋亡。
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