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压电免疫传感器具有压电质量响应的高灵敏性和生化反应的高特异性,在生物传感器的研究中日益受到重视。其中,传感器的敏感膜或生物分子识别层的构造(即生物分子的固定化)技术是研制理想的压电免疫传感器的关键之一。本论文基于等离子体聚合膜,设计了一种既能固定生物活性物质又易于传感器再生的可逆固定化方法,即采用辉光放电的等离子体沉积技术,先在石英晶体上沉积一层正丁胺等离子体聚合膜,再在膜上自组装一层带负电的聚电解质,用以静电吸附固定抗体(抗原)测定抗原(抗体)。研制了四种与临床疾病诊断密切相关的压电免疫传感器,具体内容如下: 第一章 研制了一种新的转铁蛋白压电免疫传感器。探讨了正丁胺等离子体聚合膜的形成机理和传感器主要检测条件的影响;考察了传感器的灵敏度、选择性、重现性和再生性能;传感器测定人血清中转铁蛋白的线性范围为0.10~12.65ug/mL。将其用于临床样品中转铁蛋白的测定,所得结果与酶联免疫法(ELISA)基本一致。 第二章 提出了一种测定日本血吸虫抗体的可逆压电免疫传感器。以感染兔血清为检测对象,采用聚电解质吸附固定法,将日本血吸虫分子抗原(SiAg32KD)固定于石英晶振表面,再以牛血清白蛋白(BSA)和正常兔血清(NRS)联合封闭晶振上非特异性活性位点,可在0.54~32.50ug/mL范围内检测感染兔血清中日本血吸虫抗体。实验发现,聚电解质静电吸附固定法明显优于戊二醛共价键合固定法;此外,所采用的封闭方法能较好地克服测定的假阳性率。将之用于检测不同感染程度的日本血吸虫兔血清样本,结果表明,该传感系统是临床定性和定量诊断日本血吸虫病的一种有效工具。 第三章 针对目前检测抗体的方法只能检测纯化的抗体,且操作繁琐费时,研制了一种简便实用的压电免疫传感器,用于在免标记和非纯化的条件下快 湖南大学硕士学位论文 王 样2001年6月速、准确和实时检测抗体的活性(效价)。将之用于测定了人血清白蛋白(HSA)抗体的活性,并与文献报道的表面等离子体子共振法(SPR)进行了比较,发现该传感系统的响应性能可与SPR法媲美,而且较之具有仪器简单廉价、再生简便等优点。 第 四 章 以聚乙 H醇(PEG)作为免疫反应的促进剂,提出了一种质量放大的铜蓝蛋白压电兔疫传感技术。采用上述固定化方法,将铜蓝蛋白抗体吸附固定于石英晶体表面,在含有 3.5%的聚乙二醇(PEG)缓冲溶液中测定人血清铜蓝蛋白(抗原)。传感器检测铜蓝蛋白的浓度线性范围为 0.05—3.10卜g/mL(即50-3100 ng/。L);与不采用 PEG质量放大的情况比较,传感器的测定灵敏度和检测限均有较大改善,灵敏度为 0.2710 Hi/(ng/mL),检出下限达到 31 us/mL。