【摘 要】
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研究目的:载羟基红花黄色素A（HSYA）的生物活性支架制备、表征及其促进骨修复性能的效果评价,并探索HSYA促进骨修复的作用机理。研究方法:1.网络药理学预测HSYA-骨代谢的作用靶点及相关基因。2.体内实验:大鼠颅骨缺损造模,负载不同含量HSYA的生物活性支架植入缺损部位,十二周后观察不同组缺损部位新骨形成情况,Micro-CT和H＆E染色评价颅骨缺损周围新骨形成。3.体外实验:CCK8、SEM
【基金项目】
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No.51672191+三维打印低氧模拟硼酸盐生物玻璃支架激活HTF-1α通路治疗激素性股骨头坏死；
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研究目的:载羟基红花黄色素A（HSYA）的生物活性支架制备、表征及其促进骨修复性能的效果评价,并探索HSYA促进骨修复的作用机理。研究方法:1.网络药理学预测HSYA-骨代谢的作用靶点及相关基因。2.体内实验:大鼠颅骨缺损造模,负载不同含量HSYA的生物活性支架植入缺损部位,十二周后观察不同组缺损部位新骨形成情况,Micro-CT和H＆E染色评价颅骨缺损周围新骨形成。3.体外实验:CCK8、SEM和ALP/ARS检测生物活性玻璃（1393）或载HSYA复合支架对鼠间充质干细胞BMSCs（rBMSCs）的毒性/增殖、黏附及分化;活死细胞染色评价rBMSCs存活情况;Transwell评价HSYA对人静脉内皮细胞（HUVECs）迁移能力和侵袭能力;成管实验检测HUVECs成管能力;PCR和Western blot表征成骨相关基因和蛋白表达。研究结果:1.网络药理学分析显示:红花主要成分有HSYA、豆甾醇、槲皮素和山奈酚等,且HSYA直接作用的靶点仅有HIF-1α;其涉及AKT1、APEX1、ARCYP 19A1、受体、钙结合、水解酶、转录因子、离子结合、小分子结合、癌症通路和中心碳代谢等多靶点、多途径并影响细胞增殖/存活、血管生成、粘附、迁移、凋亡和基因稳定性/损伤等多进程。2.体内实验:Micro-CT和H＆E显示了 1393/HSY A复合支架中高剂量组（0.5mg/L）与中剂量组（0.25mg/L）相较对照组具有更高的新骨形成量及更好的成骨效果。3.体外实验:CCK8揭示HSYA对rBMSCs无细胞毒性且具有明显浓度依赖型促增殖效果;SEM和活死细胞染色验证了 1393/HS YA复合支架对rBMSCs的细胞黏附及存活具有明显促进作用,且高剂量组效果最佳;与对照组相比,ALP和ARS实验揭示了中/高剂量组具有较高的钙结节和AL P形成量,显示HSYA促进成骨分化效能;Transwell和成管实验证明HSYA能够显著促进HUVECs迁移/侵袭能力和成管能力;PCR和Western blot表征显示,中/高剂量的HSYA能够明显促进OCN、OPN、ALP、RUNX2、BMP-2和HIF-1α等基因高表达。结论:生物活性玻璃/HSYA复合支架促进大鼠颅骨缺损周围的新骨形成。HSYA促进rBMSCs细胞增殖、黏附、存活、钙结节、ALP形成和成骨分化,并显著改善HUVECs的迁移/侵袭力和成管。HSYA促进HIF-1α、OCN、OPN、ALP、RU NX2和BMP-2等成骨相关基因高表达进而促进骨修复。
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