紫蛇尾(Ophiopholis mirabilis)多糖的提取、纯化及生物活性研究

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本论文以黄渤海交界处长岛海域的紫蛇尾作为实验材料,采用正交实验法优化了紫蛇尾多糖的提取工艺,测定了紫蛇尾粗多糖的脱蛋白工艺,并对紫蛇尾多糖理化性质进行了测定,研究了紫蛇尾多糖的分离纯化,以及紫蛇尾粗多糖的部分生物活性,包括:抑菌活性,抗氧化活性以及对心肌细胞的保护作用,为紫蛇尾资源的开发利用提供必要的理论依据。采用L9(34)正交实验法,以多糖产率为指标,研究提取温度、提取时间、料液比、提取次数4个因素对提取工艺的影响。以正交实验的实验结果为条件建立多元线性模型,结果表明:对紫蛇尾多糖得率影响最大的因素是温度,其次是提取次数、提取时间和料水质量比。本实验得出的最佳提取工艺条件为:料水质量比1∶20,温度70℃,提取时间4h,提取次数4次。结果可信,说明紫蛇尾多糖的产率和提取工艺相关因素有显著的相关关系。采用实验中常用的Sevag法,酶法,以及酶-Sevag法联用三种方法,进行脱蛋白比较。实验结果表明,酶-Sevag法联用是脱除紫蛇尾中粗多糖中蛋白质最为有效的方法。采用传统的水提和碱提法得到两种紫蛇尾多糖粗品,测定这两种紫蛇尾粗多糖的的部分常规理化性质,并对其进行分离纯化。采用改进的平板菌落计数法测定紫蛇尾粗多糖是否具有抑菌活性以及对不同醇沉浓度的粗多糖进行了抑菌活性的比较,并采用滤纸片法对上述实验结果进行了验证。采用改进的琼脂稀释法测定了紫蛇尾粗多糖的最低抑菌浓度。研究结果表明所提取的6种紫蛇尾粗多糖均具有抑菌活性。采用化学方法测定紫尾粗多糖的抗氧化活性,其中包括对紫蛇尾粗多糖的还原能力的测定,对超阳离子和羟基离子的清除能力的测定以及抑制红细胞膜脂质过氧化能力的测定。研究结果表明,紫蛇尾粗多糖具有较强抗氧化能力,能有效的清除羟自由基、超氧阴离子,抑制红细胞膜脂质过氧化,且其抗氧化能力与剂量成正相关性。采用过氧化法构建了心肌细胞H9c2的氧化模型,测定了紫蛇尾粗多糖对H9c2氧损伤的保护作用,以及对由氧损伤引起的H9c2细胞凋亡率、线粒体膜电位、BCl-2、Bax表达、AKT细胞通路的影响,以及对缺氧心肌细胞内Ca2+浓度的影响。研究表明紫蛇尾粗多糖在较低的浓度下均能对由氧损伤引起的H9c2细胞凋亡率、线粒体膜电位、BCl-2、Bax表达、AKT细胞通路,以及缺氧心肌细胞内Ca(2+浓度产生明显的影响。
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