葫芦多糖及硫酸化修饰物的抗新城疫病毒和增强免疫活性的研究

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多糖是生物体内重要的生物大分子,多糖具有调节免疫,抗病毒等多种功效。研究表明多糖经硫酸化修饰后大部分修饰物的各种功效得到了较大的提升。为研制多糖类抗新城疫病毒(NDV)及免疫增强类药物。本研究以幼嫩的葫芦为试验对象,采用响应面法对葫芦粗多糖(cLSP)的提取条件进行优化。通过体外实验筛选出cLSP中抗NDV及淋巴细胞增殖作用最强的多糖,对筛选出的多糖进行纯化及硫酸化修饰,最后通过体内外试验筛选及验证纯化的葫芦多糖(LSP)或硫酸化葫芦多糖(sLSP)中抗NDV及增强免疫活性最强的活性成分。主要结果如下:1.葫芦粗多糖(cLSP)最佳提取工艺条件为:提取温度82℃、水料比24:1 mL/g、提取时间2.3 h、提取次数2次。此条件下,多糖提取率可达5.810±0.240%。2.cLSP体外抗新城疫病毒作用的研究表明,cLSPt及4种分级多糖均具有抗NDV活性,对NDV的抑制作用及直接杀灭作用强于对NDV的阻断作用。其中cLPSt的抗NDV活性最强。3.cLSP体外对鸡淋巴细胞增殖作用的研究表明,除cLSP30外的所有多糖在一定浓度下能单独和协同LPS刺激脾脏淋巴细胞增殖,所有多糖在一定浓度下能单独和协同ConA刺激外周血淋巴细胞增殖。4种多糖中cLSP50的增殖作用最强,对脾脏淋巴细胞及外周血淋巴细胞单独作用时的增殖率分别为6.71%、6.63%。4.cLSP的纯化及硫酸化修饰结果表明,纯化后的多糖LSPt及LSP50的糖含量分别为76.80%、91.60%。sLSP的红外光谱结果显示,sLSPt在829 cm-1、1219 cm-1,sLSP50在1262 cm-1均有吸收峰,为硫酸酯的特征吸收峰,说明硫酸化修饰物制备成功。5.LSPt及其4种硫酸化修饰物抗新城疫病毒作用的研究表明,cLSPt、LSPt及4种硫酸化修饰物均具有抗NDV作用,其中LSPt及sLSPt1.8的体外抗NDV活性较好。LSPt及sLSPt1.8均能提高新城疫模型雏鸡抗体水平,保护率及痊愈率。2组药物中sLSPt1.8组体内对鸡新城疫的痊愈率及保护率最高,分别为16.7%、33.3%。6.LSP50及其4种硫酸化修饰物对雏鸡增强免疫活性的研究表明,各组多糖及其硫酸化修饰物中,LSP50和sLSP501.2对鸡外周血淋巴细胞体外增殖作用最强,增殖率分别为13.57%、15.54%。LSP50及sLSP501.2均可显著提高新城疫疫苗接种的雏鸡一段时间内的抗体水平、增强IL-2、IL-6及IFN-γ等淋巴因子的分泌,提高淋巴细胞的增殖,增殖率分别为30.62%、28.07%,两组药物中LSP50的作用强于sLSP501.2
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