研究背景及目的:在哺乳动物NeuroD在脑的发育中广泛表达而且是中枢神经系统形成所必须的,尤其是海马和小脑的颗粒细胞产生过程中尤为重要。神经祖细胞和放射状胶质细胞中都无NeuroD表达,而在有丝分裂后期细胞可以检测到其表达,并在变性坏死后期神经系统再生的新生细胞NeuroD的表达量有所增高。本研究即构建NeuroD1慢病毒载体,观察并验证NeuroD1对大鼠神经干细胞的表达活性。方法:利用SD大鼠新生鼠脑cDNA模板,设计合成NeuroD的cds区引物序列,用PCR扩增出目的片段,凝胶回收纯化和双酶切,将NeuroD基因连接在慢病毒表达载体上,并与DH5a细菌同源重组,挑选阳性克隆,小提质粒行基因测序鉴定,大抽质粒后用Lipo2000转染293细胞,包装浓缩得到lv-NeuroD1和Lv-Green重组慢病毒;分离孕13-15 dSD大鼠胚胎脑NSCs,无血清培养基(DMEM/F12,含bFGF、EGF、B27等)条件下培养,免疫细胞化学法鉴定神经干细胞;慢病毒转染SD胎鼠神经干细胞,qPCR法检测NeuroD1的表达情况。结果:在本实验中,经检测我们成功地构建NeuroD1慢病毒表达载体;分离并鉴定了孕14-16天SD大鼠胎鼠脑NSCs,并在体外培养增殖;NeuroD1慢病毒转染神经干细胞后,能在神经干细胞中过量表达。结论:成功构建了大鼠脑源性NeuroD1慢病毒载体,成功转染神经干细胞,为进一步研究NeuroD1在神经干细胞分化中的信号通路和基因工程神经干细胞治疗研究奠定了基础。