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目的1、观察以2型重组腺相关病毒(rAAV2)为载体、人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控下的重组活性caspase-3(rev-caspase-3)基因转导体系(rAAV2-hTERT-rev-caspase-3)对人卵巢癌AO细胞及人胚肺成纤维细胞(HELF)生长的影响。
2、探讨rAAV2-hTERT-rev-caspase-3对AO细胞及HELF诱导凋亡的作用。
3、评价rAAV2-hTERT-rev-caspase-3对裸鼠人卵巢癌皮下移植瘤和腹腔移植瘤模型的治疗效果。
方法1、RT-PCR法检测AO细胞和HELF中hTERT表达水平；
2、以携带报告基因——重组绿色荧光蛋白(EGFP)的表达体系rAAV2-EGFP体外转染AO细胞和HELF，估测转染效率；
3、以rAAV2-hTERT-rev-caspase-3体外转染AO细胞及HELF，通过CCK-8法检测细胞存活率；TUNEL检测细胞凋亡；RT-PCR、免疫细胞化学法检测rev-caspase-3基因表达；
4、构建裸鼠人卵巢癌皮下移植瘤及腹腔移植瘤模型，以rAAV2-hTERT-rev-caspase-3瘤体内或腹腔内注射，通过观察肿瘤体积、肿瘤重量、小鼠体重等指标评价其疗效及副反应。以TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡，RT-PCR、免疫组织化学法检测rev-caspase-3基因表达。
结论1.rAAV2-hTERT-rev-caspase-3转导系统可有效转染人上皮性卵巢癌AO细胞并介导基因特异性表达，诱导细胞凋亡，同时对正常细胞无杀伤作用。
2.rAAV2-hTERT-rev-caspase-3转导系统可有效抑制裸鼠人卵巢癌皮下移植瘤和腹腔移植瘤的生长，同时对正常组织无明显毒副作用。
3.rAAV2-hTERT-rev-caspase-3可能成为卵巢癌靶向性基因治疗的一种安全、有效的策略。