CD4~+CD25~+调节性T细胞移植对缺血性脑卒中大鼠脑白质的保护作用

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目的1.构建脑缺血/再灌注大鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞静脉输注移植治疗模型,探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞输注移植对脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积和神经功能的影响。2.通过观察脑缺血/再灌注大鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞输注移植后脑白质组织学相关指标,研究CD4~+CD25~+调节性T细胞对缺血后脑白质损伤的作用。方法1.选用健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,体重275g-300g。将动物随机分为:正常组(co)、假手术组(sham)和手术组。采用改良的Zealonga线栓法对手术组大鼠施行大脑中动脉阻塞缺血再灌注(MCAO/R)术。手术组分为以下三个亚组:调节性T细胞输注移植组(Treg组),经股静脉输注移植2×106个大鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞,构建调节性T细胞输注移植治疗模型;脾细胞输注移植组(SP组),经股静脉输注移植同等数量的脾细胞;PBS输注组(PBS组)经股静脉注入等体积的PBS缓冲液。分别在移植术后24h和72h对大鼠神经功能进行评定,术后72h断头取脑,采用TTC染色和图像分析软件计算梗死体积,并对手术组脑梗死体积和神经功能学评分进行相关统计学分析。2.选用健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,体重275g-300g。将动物随机分为:正常组(co)、假手术组(sham)和手术组。采用改良的Zealonga线栓法对手术组大鼠施行大脑中动脉阻塞缺血再灌注(MCAO/R)术。手术组分为以下三个亚组:调节性T细胞输注移植组(Treg组),经股静脉输注移植2×106个大鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞,构建调节性T细胞输注移植模型;脾细胞输注移植组(SP组),经股静脉输注移植同等数量的脾细胞;而在PBS输注组(PBS组)经股静脉注入等体积的PBS缓冲液。术后72小时断头取脑,制备脑组织石蜡切片,免疫荧光染色观察缺血半球寡突胶质细胞(Oligedendrocytes,OLs)及髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经丝蛋白200(NF200)标记的轴突,并对OLs数量及MBP、NF200荧光强度进行相关统计学分析。结果1.调节性T细胞输注移植组脑梗死体积及梗死半球体积占健侧体积的比值较SP组和PBS组均显著减小(p<0.01);在术后24h、72h神经功能评分实验中,Treg组ZeaLonga评分均显著低于SP组和PBS组(p<0.01),24h、72h mNSS评分见Treg组较SP组和PBS组亦显著降低(p<0.05)。2.免疫荧光显微镜检测脑缺血后脑白质相关指标显示:手术组缺血半球梗死边缘区纹状体部位MBP、NF200较正常组和假手术组同侧半球相比,荧光强度显著降低(p<0.05),Treg组较SP组、PBS组上述指标荧光强度均显著增强(p<0.05)。观察各组缺血半球胼胝体部位OLs可见,手术组较对照组数量显著减少(p<0.01),Treg组较SP组、PBS组数量显著增多(p<0.01)。结论1.采用股静脉输注移植方式可以成功构建出稳定的大鼠脑缺血再灌注CD4~+CD25~+调节性T细胞输注移植治疗模型。2. CD4~+CD25~+调节性T细胞可以减小MCAO/R大鼠脑梗死体积,降低缺血后神经功能缺损,提高神经功能恢复。3. CD4~+CD25~+调节性T细胞输注移植可以降低缺血对寡突胶质细胞和轴突造成的损害,减轻脑缺血后白质损伤。
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