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茶具有抗肥胖功效,近年来有研究表明肠道菌群与肥胖之间存在密切的关系,肠道菌群的失衡被认为是肥胖的重要诱因。PCR-DGGE技术是肠道微生态解析的主要手段之一,但传统的PCR-DGGE技术受限于所分离DNA分子长度无法得到精准的菌群信息。因此本课题构建了细菌单双链复合体(single-double stranded complex,SDSC)对传统DGGE技术加以改善,并以高脂饮食诱导的肥胖鼠(HF)以及饮茶干预小鼠为研究对象,应用DGGE法探究了高脂饮食及饮茶干预对小鼠肠道拟杆菌及乳酸菌群落结构的影响。本课题内容主要包括以下三部分:1、应用PCR-DGGE方法解析实验鼠肠道菌群16SrDNAV3可变区,探究了高脂饮食及饮用绿茶(GT)、乌龙茶(OT)以及红茶(BT)干预对实验鼠肠道菌群结构组成的影响。发现实验鼠肠道优势菌群包括乳杆菌属(Lactobacillus sp.)等6个优势属。通过比较高脂饮食小鼠与正常小鼠肠道细菌菌群发现,高脂饮食使德氏乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckii)等7个属消失,菌群丰富度下降。饮用绿茶(GT)使得马特尔氏菌(Martelella sp.)以及Anaeroplasma bactoclasticuuum重新富集,一定程度上抑制了菌群丰富度的下降;饮用乌龙茶和红茶均可抑制厚壁菌(Firmicutes sp.)的生长。2、构建了拟杆菌属特异性的单双链复合体SDSC-Bac用于DGGE中分析拟杆菌在种水平的变化。SDSC-Bac法得到优势条带10条,可明确鉴定为拟杆菌属中具体的某一个种的条带共8条,比例为8/10;其余两条只可在属水平进行分类。而拟杆菌特异性16SrDNA V3可变区DGGE分析得到优势条带14条,可明确鉴定为拟杆菌属中的具体的某一个种的条带共4条,比例为4/14。对比二者鉴定结果可知,单双链复合体在DGGE中的应用大大提高了条带分子鉴定的精确度;但带来了一定数量的优势条带数目丢失。3、构建了乳酸菌特异性单双链复合体SDSC-Lac用于DGGE中分析乳酸菌在种水平的变化。SDSC-Lac法得到9条序列信息(DGGE总条带数目14条,其中5条浓度较低,不满足回收测序条件),其中6条分别鉴定为乳酸菌属中的6个种。而乳酸菌16SrDNA V3特异性可变区的PCR-DGGE共得到12条序列信息(DGGE总条带数目12条),其中5条鉴定为乳酸菌属中的3个种。由此可见单双链复合体的应用可以在保证分离效果的前提下提高菌群鉴定的精确度。综上,利用属特异性引物构建目标菌群SDSC片段用于DGGE中解析特定菌群的微生态结构可以提高菌群鉴定的精确度,有利于复杂环境中关键菌群的发现。SDSC在DGGE分析中可能会带来部分优势条带的丢失,但可以通过优化SDSC的制备条件及DGGE条件以减少条带丢失。