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目的:⑴研究雪卡毒素对昆明雌性小鼠血清蛋白质表达的影响。⑵筛选并鉴定有差异表达的血清蛋白质,为雪卡毒素中毒确定候选靶标提供科学依据。
方法:①将36只体重为18~22g昆明雌性小鼠随机分为:高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组,高、中和低剂量组雪卡毒素染毒剂量分别为0.47μg/kg、0.16μg/kg和0.05μ g/kg,对照组给予1%吐温-60/0.9%生理盐水溶液,腹腔注射后,在第6h、12h和24h进行眼球取血并分离血清。②利用荧光差异凝胶电泳分离小鼠血清蛋白质,用DeCyderTM2-DSoftware Version6.5软件分析图像,筛选出有统计学意义的差异蛋白质。③运用基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱仪鉴定差异蛋白质,并进行Western blotting反向验证。
结果:⑴不同剂量雪卡毒素染毒的昆明小鼠出现相应的中毒症状,主要包括:颤抖、怕冷、步态不稳等。⑵雪卡毒素对小鼠血清蛋白质产生了一定影响,与雪卡毒素染毒可能相关的蛋白质有:转甲状腺素蛋白、间α胰蛋白酶抑制剂重链H4、锌α2糖蛋白和载脂蛋白C-Ⅲ。⑶Western blotting验证得到转甲状腺素蛋白随着剂量增加表达上调,与荧光差异凝胶电泳联合质谱分析的结果一致。
结论:①雪卡毒素引起我国昆明雌性小鼠出现相应的中毒症状,随着剂量的增加,其中毒症状越明显。②筛选出的血清差异蛋白质与雪卡毒素中毒临床症状可能相关,不仅为其毒作用机制研究提供候选靶标,还可能成为生物标志物应用于早期诊治。