目的:本实验拟研发一类基于CD44核酸适配体、核仁素核酸适配体和DNA四面体的双靶向DNA纳米载药系统,并将阿霉素药物分子以嵌插结合的方式装载于DNA四面体上。然后,在体外细胞水平进一步评价上述构建的双靶向载药系统对黑色素瘤A375细胞的靶向性和有效性。方法:(1)PCR构建DNA纳米载药复合体;(2)将上述PCR构建的载药复合体与阿霉素共孵育,构建装载阿霉素药物分子的载药复合体;(3)血清稳定性实验评价载药复合体耐核酸酶降解能力;(4)流式细胞术验证载药复合体对黑色素瘤A375细胞的靶向性;(5)CCK8实验检测载药复合体抑制黑色素瘤A375细胞增殖能力;(6)流式细胞术检测载药复合体对黑色素瘤A375细胞周期的影响。结果:(1)本实验成功组装构建了五种单靶向和四种双靶向DNA纳米载药复合体;(2)成功构建了九种装载阿霉素药物分子的靶向DNA纳米载药复合体;(3)血清稳定性实验结果表明,上述构建的载药复合体的血清稳定性明显增强;(4)流式细胞术结果显示,与单靶向DNA纳米载药复合体和阴性对照组相比,上述构建的四种双靶向DNA纳米载药复合体具有更强的靶向识别黑色素瘤A375细胞的能力,其中,AS1411-1和Aptamer1组合的双靶向载药复合体的效果最佳;(5)CCK8实验结果表明,与单靶向DNA纳米载药复合体和游离阿霉素对照组相比,四种双靶向DNA纳米载药复合体具有更强的抑制黑色素瘤A375细胞增殖的能力,并具有一定的浓度依赖性和时间依赖性,而且,AS1411-1和Aptamer1组合的双靶向载药复合体的抑制能力最强;(6)流式细胞术结果表明,与游离阿霉素对照组相比,四种双靶向载药复合体诱导黑色素瘤A375细胞发生G1期阻滞的能力明显增强。结论:本实验成功构建了四种基于CD44和核仁素核酸适配体的双靶向DNA纳米载药系统。体外初步评价结果表明:与单靶向载药复合体和阴性对照组相比,上述四种靶向载药复合体具有更强的耐核酸酶降解能力、靶向黑色素瘤A375细胞的能力、抑制A375细胞增殖的能力和诱导A375细胞发生G1期阻滞的能力。上述研究结果为肿瘤的靶向治疗提供了新方法和新技术。