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青花菜（Brassica oleracea L.var.italica Planch）的主要商品器官是其幼嫩的花球,因而适时开花对其产量、品质等具有较大影响。开花代表着植物由营养生长过渡至生殖生长,这一环节的准确控制需通过植物内精细的调控网络。前人研究证实,拟南芥MADS-box转录因子家族成员参与开花调控,如AGL18、AGL19、AGL24和SOC1等。同时,AGL18（或是AGL15）可通过招募HDAC复合体至FT染色体位点,进行周期性组蛋白去乙酰化修饰,以阻止植物提早开花。转录辅抑制因子TPL或SAP18参与调控开花时间,且可与EAR基序蛋白互作,本试验克隆得到的AGL18蛋白内含有EAR基序,二者之间是否可相互调节,目前并不清楚。为阐明上述蛋白间互作关系,以便为青花菜花球发育调控奠定基础,本研究克隆青花菜HDA9、AGL18、SAP18和TPL基因,利用酵母双杂交系统和GST pull-down检测HDA9、AGL18、SAP18、TPL与开花整合子AGL19、AGL24、SOC1蛋白间相互作用,同时,利用酵母单杂交和双荧光素酶系统检测HDA9、AGL18、AGL19、SAP18、TPL蛋白与AGL24、SOC1启动子互作关系。主要试验结果如下:1.青花菜HDA9、AGL18、SAP18和TPL基因克隆与生物信息学分析试验克隆了青花菜HDA9、AGL18、SAP18和TPL基因,cDNA序列分别为1281 bp、777 bp、459 bp和3452 bp,分别编码426、258、152和1129个氨基酸,相应的蛋白分子量为48.75 kD、28.73 kD、17.36 kD和124.33 kD,均属亲水蛋白,亲缘关系上与十字花科甘蓝、油菜等较近,拟南芥次之。2.青花菜AGL18蛋白可与AGL24蛋白发生互作以Y187（pGADT7-AGL18）为猎物蛋白,Y2HGold（pGBKT7-AGL24）为诱饵蛋白,酵母双杂交试验发现酵母融合菌株可在DDO/A和QDO培养基上正常生长,并在QDO/X/A上长出蓝色菌斑,载体互换结果一致。GST pull-down试验发现GST-AGL18与HIS-AGL24共孵育泳道有两条蛋白条带,大小分别为55 kD、45 kD,与相应的蛋白分子量相符,说明AGL18可与AGL24发生蛋白互作。3.青花菜AGL18、HDA9、SAP18、TPL蛋白与SOC1启动子互作酵母单杂交试验表明:Y1HGold[（pAbAi-SOC1）×（pGADT7-AGL18）]、Y1HGold[（pAbAi-SOC1）×（pGADT7-HDA9）]、Y1HGold[（pAbAi-SOC1）×（pGADT7-SAP18）]和Y1HGold[（pAbAi-SOC1）×（pGADT7-TPL）]菌株均可在SD/-Leu/ABA100固体平板上正常生长,表明青花菜AGL18、HDA9、SAP18、TPL蛋白可与SOC1启动子相互作用。双荧光素酶系统检测结果表明,青花菜AGL18、HDA9、SAP18、TPL蛋白可与SOC1启动子在本氏烟植株体内发生相互作用。4.青花菜AGL18、HDA9蛋白与AGL24启动子互作酵母单杂交系统和双荧光素酶系统证实:青花菜AGL18、HDA9蛋白与AGL24启动子存在蛋白-DNA互作。5.青花菜HDA9蛋白与AGL18、AGL19、AGL24、SOC1蛋白无相互作用酵母双杂交系统检测HDA9与AGL18、AGL19、AGL24、SOC1蛋白互作关系,结果显示,酵母融合菌株在DDO/A、QDO和QDO/X/A固体培养基上均无法正常生长,即HDA9蛋白无法与AGL18、AGL19、AGL24和SOC1结合,不能激活报告基因表达。进一步通过GST pull-down发现,在蛋白共孵育泳道内均只有HIS-HDA9一条蛋白条带,说明HDA9与AGL18、AGL19、AGL24、SOC1均无蛋白互作。6.青花菜SAP18蛋白与HDA9、AGL18、AGL19、AGL24、SOC1蛋白无相互作用酵母双杂交试验鉴定SAP18与HDA9、AGL18、AGL19、AGL24、SOC1蛋白互作关系,结果表明:二倍体融合酵母菌均无法激活报告基因HIS3、MEL1、AUR1-C和ADE2表达。GST pull-down试验表明,HIS-SAP18与GST-HDA9、GST-AGL18、GST-AGL19、GST-AGL24、GST-SOC1共孵育泳道内均只有一条大小约为37 kD蛋白条带,说明SAP18蛋白与HDA9、AGL18、AGL19、AGL24、SOC1蛋白无互作。7.青花菜TPL蛋白与SAP18、HDA9、AGL18、AGL19、AGL24、SOC1蛋白无互作使用Y187（pGADT7-TPL）为猎物蛋白,Y2HGold（pGBKT7-SAP18）、Y2HGold（pGBKT7-HDA9）、Y2HGold（pGBKT7-AGL18）、Y2HGold（pGBKT7-AGL19）、Y2HGold（pGBKT7-AGL24）和Y2HGold（pGBKT7-SOC1）为诱饵蛋白,酵母双杂交结果表明,TPL与SAP18、HDA9、AGL18、AGL19、AGL24、SOC1之间均无蛋白互作,载体互换后结果一致。