曰本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶(SjAPRT)是血吸虫嘌呤补救途径中的关键酶,它催化腺嘌呤生成腺苷一磷酸(AMP)。已有文献报道在日本血吸虫鉴定出两条编码APRT的基因序列SjAPRT1和SjAPRT2 (GenBank Accesion: AAW24796,AAW25340)。本研究在已有序列的基础上通过RT-PCR获得了日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶两条基因(SjAPRTs)并利用Real time PCR及Western blotting技术分析其在日本血吸虫各虫期转录水平和蛋白水平差异。将目的基因亚克隆至载体pET28a,转化至大肠埃希菌BL21菌株进行诱导表达,纯化的蛋白免疫小鼠Western blotting分析其免疫反应性,并进行动物实验了解其保护性效果。以纯化的rSjAPRTs作为包被抗原通过ELISA方法评估其免疫诊断价值。RT-PCR扩增结果显示在虫卵、尾蚴、童虫和成虫均检测到SjAPRT1及SjAPRT2基因转录本,Real time PCR结果显示SjAPRTs在各虫期的转录水平存在一定差异,在成虫及虫卵期的表达量均为童虫期的2倍左右。Western blotting分析结果表明在虫卵、童虫和成虫中检测到rSjAPRTl多抗兔血清特异性识别条带,尾蚴中未检测到特异性条带；而在尾蚴和童虫中检测到rSjAPRT2多抗兔血清特异性识别条带,成虫中识别条带较弱。这一结果暗示SjAPRTs的两种同工酶可能在血吸虫不同发育阶段发挥作用,而SjAPRT 1在成虫中发挥主要作用。此外纯化的重组蛋白rSjAPRTs可被日本血吸虫感染兔血清识别,表明其具有一定的免疫反应性。以rSjAPRTl, rSjAPRT2作为包被抗原检测日本血吸虫病人血清的间接ELISA方法结果显示检测疫区病人血清的敏感性分别为60%,63.3%,非疫区正常人血清特异性分别为96.6%,93.3%。动物保护性实验结果显示rSjAPRT1免疫小鼠后可诱导产生13.6%的减虫率和14.4%的肝脏减卵率。