荧光假单胞菌是革兰氏阴性菌,是养殖鱼类常见病原之一。在前期研究中,我们自病鱼组织中分离到一株鱼类致病性荧光假单胞菌TSS,并发现铁吸收调节蛋白Fur(ferric uptake regulator)对该菌株的致病性至关重要。Fur是一个转录调控因子,通过识别和结合特定的DNA序列控制靶向基因的表达。本研究通过比较蛋白质组学手段系统分析了TSS野生株和fur敲除株的全蛋白表达谱差异,共鉴定出分属于不同功能类群的28个差异表达蛋白;针对其中四个蛋白,即TssP(VI型分泌系统蛋白)、PspA(丝氨酸蛋白酶)、OprF(外膜蛋白)和ClpP(ATP依赖的Clp蛋白酶水解亚基),分别进行了基因敲除并获得了相应突变株;以大菱鲆为实验动物,对这四株突变菌株进行功能检测,发现oprF和clpP敲除株在抗宿主血清杀伤、侵染宿主组织和导致宿主死亡等三方面的能力均显著下降,相比之下,tssP和pspA突变株与野生株的致病性没有明显差异;大肠杆菌异源表达的重组OprF蛋白经纯化后作为亚单位疫苗免疫大菱鲆,可在受免鱼中引起特异性血清抗体的产生,并对TSS感染具有显著的免疫保护作用;另外发现,OprF抗体封闭致使TSS感染能力显著降低,进一步证明了OprF在荧光假单胞菌致病过程中的重要作用。