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卵巢癌是一种严重威胁女性生命的疾病。卵巢组织不仅是雌激素和孕激素的主要分泌器官，而且也是甾体激素，如雌激素、孕激素、雄激素以及糖皮质激素等的靶器官。因为已发现在卵巢癌活检组织中，雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的阳性率约50％，雄激素受体(AR)阳性率约95％，并在多个卵巢癌细胞系以及88％以上的卵巢癌活检组织中检测到糖皮质激素受体(GR)的存在，提示甾体激素在卵巢癌的发生发展过程中可能有重要作用。对甾体激素与卵巢癌细胞的增殖、分化、转移等的研究表明，甾体激素可以通过内分泌、旁分泌以及自分泌途径影响卵巢癌细胞的增殖。但卵巢癌的内分泌学远没有乳腺癌和前列腺癌那么深入，迄今的结果也没有显示卵巢癌的发生和发展象乳腺癌与雌激素，前列腺癌与雄激素那样，与某种甾体激素有明确的关系，表明卵巢癌的激素调控可能更为复杂。糖皮质激素(GC)是调控人体代谢和发育的重要激素，能调节多种正常细胞的增殖和分化，但GC对卵巢癌细胞增殖影响的研究不多。该激素与卵巢癌关系的研究还有待于进一步深入，这对阐明卵巢癌发生和发展机制有重要意义。 HO-8910是由我国浙江肿瘤所建立的高转移性人卵巢癌细胞系，来源于低分化浆液性囊腺癌患者腹水。该细胞具有ER、PR和AR，本实验室以往的研究表明，雌二醇、孕酮和睾酮等对该细胞增殖没有明显作用，但糖皮质激素能明显抑制HO-8910细胞的增殖。以~3H-Dex为配体，采用完整细胞受体测定法还证实该细胞具有低容量、高亲和力的糖皮质激素受体(GR)。受体的最大结合容量(Ro)值为490fmol／10~6细胞，表观解离常数(Kd)值为44.3nmol／L。但GC对该细胞的增殖抑制作用是否通过受体介导，之后的分子机制是什么尚不清楚。本课题拟观察GC对调控细胞增殖的信号转导途径和细胞周期调控蛋白的影响，以探讨GC对HO-8910细胞增殖抑制作用的分子机制。一一、Dex对HOS 细胞增殖的影响 我们首先采用细胞计数方法研究了 GC对 HO－89细胞增殖的影响。结果发现，与对照组相比，Dex组细胞数明显减少，这种减少具有Dex浓度依赖性。当Dex浓度在 10”6 M时，细胞数比对照组减少了 47％仔＜0刀1卜 Dex对该细胞的增殖抑制作用亦具有时间依赖性。用Mry法与细胞计数法所得结果基本一致。 我们进一步观察了Dex对HO－8910细胞细胞周期分布的影响。用含10‘’M的kx分别处理细胞不同时间后，利用流式细胞仪检测细胞周期备时相的分布。结果显示，与对照组比较，DCX作用12小时、24 ／J’时和48小时后，G。／GI期细胞分别增加了9％、20石％和28．2WP＜0．01）。该结果表明，Dex能使＊0－8引0细胞停滞在 G。／GI期。 GR桔抗剂RU486对Dex抑制该细胞增殖作用的阻断实验表明，RU486能够阻断Dex的增殖抑制作用，表明Dex对HO－8910细胞的增殖抑制作用由GR介导。二、Dex对HO8910周期蛋白抑制剂p21的影响 已知细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（CDXi）如 pZI“F’／CP介导了细胞周期在GI期的停滞，为探讨D瞅抑制HO七910细胞周期进展的作用是否与诱导昨—”“’P’有关，我们用RTICR方法首先证实HO｛9 m细胞有p刀—F’‘CP’m NNA的表达。进而采用定量RTPCR方法发现Dex能以浓度和时间依赖性的方式诱导pZIWAF’／CI”的表达，当用 10“’M Dex将细胞处理 8小时后，Dex组 PZIWAF’／CIP’m洲A表达比对照组增加 2．84倍o＜0．01卜该效应能被 GR a抗剂 RU4U486完全逆转。表明 D肛与其受体结合后通过诱导 HO｛ 细胞 pZIWAFI／C川的表达，介导了DCX诱发该细胞GdGI期停滞过程。三、Dex抑制HO8910细胞增殖的作用机制 在证实了GC能抑制HO－8910细胞增殖的基础上，我们提出了工作假说，即糟皮质欲景抑创人卯县瘤匆胞豆m一8910 W殖的分子机创．卜 一 GC的增殖抑制作用很可能是GC与受体结合后，抑制了具有细胞增殖促进作用 的信号转导蛋白的表达／活性，或者促进了细胞增殖抑制性信号转导蛋白的表达／ 活性。为此，我们研究了Dex对一些细胞增殖调控蛋白表达或活性的影响。 （一）Dex对HO－8910细胞TGF pl及其受体表达的影响 转化生长因子pl（TGF61）是具有增殖抑制作用的细胞因子，能抑制多种肿 瘤细胞，包括 HO－89 0细胞的增殖。因此我们研究了 TGF日 1信号通路在 GC增 殖抑制作用中可能的作用。用 RT—PCR方法和 ELISA方法证实 HO．8910细胞能 表达TGF pl的mRNA并分泌该蛋白。但用不同浓度Dex处理细胞后进行定量 RT－PCR分析，结果没发现Dex组的TGF日 IInRNA与对照组之间有显著性差异， 表明 Dex对 HO—89 0细胞 TGF sl的表达没有影响。 TGF 6受体（T 6 R）分为 I型受体厂 p R勺和和＊型受体（T B R－11），属于丝／苏 氨酸蛋白激酶oSTK）型受体。运用RTPCR方法证实HO—8910细胞能表达上述 两种受体 mK