【研究背景与目的】肝细胞癌（HCC）是炎症相关的恶性肿瘤,最新的癌症流行病学调查显示,肝细胞癌发生率在全球排名第六,致死率第三。远处转移是导致肝细胞癌死亡的重要原因。肿瘤转移受到肿瘤微环境（TME）的驱动,在肝细胞癌中,TME主要由成纤维细胞、内皮细胞和浸润的免疫细胞组成,肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）是TME的关键成分,通过多种方式促进肝细胞癌的转移,与肝细胞癌患者的预后密切相关,但具体的调节机制尚未完全阐明。胞质分裂蛋白8（DOCK8）属于非典型的鸟嘌呤核苷酸交换因子（GEF）,在免疫细胞中高度表达。通过GEF依赖方式和非依赖方式,DOCK8能够参与调节免疫细胞多种功能,包括细胞生存、迁移、免疫突出形成和细胞因子产生等。研究发现:人类DOCK8基因突变或缺失导致其表达下调,病人表现为反复病毒感染和早发恶性肿瘤的联合免疫缺陷综合征（DIDS）,提示DOCK8具有肿瘤抑制功能。课题组前期研究发现:在肝癌组织浸润的巨噬细胞中,DOCK8蛋白的表达水平明显下调;而DOCK8在TAMs中的作用尚无研究报道。因此,研究DOCK8对TAMs表型及功能的调节及对肝细胞癌进展的影响和机制,为寻找治疗肝癌患者的新靶点提供实验依据具有重要意义。【研究内容及方法】1.肝癌组织巨噬细胞的DOCK8蛋白表达:收集临床病人肝癌和癌旁组织,冰冻切片,免疫荧光检测巨噬细胞DOCK8蛋白表达水平。2.敲低巨噬细胞中DOCK8表达及验证:通过si RNA转染敲低巨噬细胞的DOCK8表达;采用Western blot检测转染后巨噬细胞中DOCK8蛋白水平,选择干扰效果最好的DOCK8 si RNA序列进行后续实验。3.敲低巨噬细胞DOCK8对肝癌细胞癌恶性表型影响:1共培养实验:THP1细胞接种在培养小室上层,PMA诱导成巨噬细胞后,转染DOCK8 si RNA;培养小室下层接种肝癌细胞进行共培养。2肝细胞癌行为学实验:敲低DOCK8的巨噬细胞与肝癌细胞系（Hep G2、Hep3B）在Transwell小室中共培养,然后分别检测肝癌细胞增殖、克隆形成、集落形成以及迁移侵袭能力。3体内实验:将上述与巨噬细胞共培养的Hep G2细胞通过裸鼠皮下成瘤实验及裸鼠尾静脉注射实验分别检测敲低巨噬细胞DOCK8对Hep G2的体内生长和转移的影响。4.巨噬细胞DOCK8下调对肝细胞癌恶性表型影响的机制探讨:定量PCR法检测TAMs相关标志物的表达;Western blot检测肝癌细胞中相关信号分子的变化。【结果】1.DOCK8蛋白在人肝癌组织的巨噬细胞中明显下调。2.DOCK8 si RNA转染成功敲低了巨噬细胞的DOCK8蛋白表达水平。3.与敲低DOCK8的巨噬细胞共培养后,肝癌细胞体外的增殖、迁移和侵袭能力明显增强,在裸鼠体内的成瘤和转移能力也明显高于对照组。4.与肝癌细胞共培养后,敲低DOCK8的巨噬细胞中IL-10表达水平显著提高。5.与DOCK8敲低的巨噬细胞共培养后,肝癌细胞中STAT3的磷酸化水平升高。【结论】在肝细胞癌肿瘤微环境中,巨噬细胞DOCK8下调促进了肝癌细胞的增殖与转移,其机制可能与巨噬细胞上调的IL-10激活了肝癌细胞中STAT3信号通路有关。