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低温敏感性启动子是一类特殊的启动子,它们在低温下的转录强度高于常温下的。低温下表达外源蛋白,可以增加蛋白的可溶性；一些热敏感的蛋白非常适合低温表达。自然界的低温敏感性启动子数量较少。为了研究这类启动子的特点,以及构建新型的低温表达载体,本课题运用人工启动子文库(SPL)技术,筛选人工的低温敏感性启动子,并对这些启动子进行研究。建立了适合低温敏感性启动子筛选的方法。通过对比研究抗性基因kan和绿色荧光蛋白基因EGFP各自做报告基因时的优缺点,确认采用EGFP基因为本课题中启动子的报告基因。建立了简便的双层平板诱导法对启动子进行初筛。通过分析对比大肠杆菌中四种冷激蛋白基因的启动子序列,设计了随机的人工启动子序列,运用反向PCR技术建立了包含1500个以上转化子的人工启动子文库。初筛后获得106个有效启动子；复筛后得到17个低温敏感性启动子;测序后确认了7个不同的低温敏感性启动子。选择温度敏感性较好的强启动子P129和弱启动子P3分别进行了特征测定。分析过程中以天然的低温敏感性启动子PCspA为对照,发现P129和P3各方面的特性均与PCspA类似。最佳表达温度为15℃；持续表达时间长达45 h；最佳表达的菌龄在对数生长早期(OD600为0.4左右)。以D15基因检验了P129和P3的表达蛋白的效果。发现P3启动子的效果与用荧光蛋白检测的结果一致,即表达强度弱于PCspA启动子。另外,比对D15基因在T7启动子下的表达情况,发现低温敏感性启动子未形成包涵体,而T7启动子下形成了严重的包涵体。这证明了低温敏感性启动子在表达某些蛋白时具有一定优势。